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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
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질문 western blot / actin 의 band가 계속 끌려서 나옵니다..
알flfps(과기인)  |  2019.07.28 16:10
첨부파일 파일첨부: Actin 8% gel 19.07.28.jpg (99 KB)
이미지 첨부파일

안녕하세요!!

 

요즘 wetern  blot을 진행 하고 있는 학생입니다.

 

몇달 전에는 안그러던 band 들이 최근에 들어서 그리고 새로 sample 을 만든 것과 함께 계속 전부는 아니지만 몇몇 band가 계속 끌려서 나오는 현상이 나타나고 있습니다. 

각 well 당 volume 맞춰서 20 ug 씩 걸었는데 첨부 파일과 같은 결과가 계속 나오고 있고 어느날은 band의 끌림이 없이 나타나고 어쩔때는 몇몇 band 에서 이상하게 끌림이 관찰 되고 있습니다. 

이러다 보니 결과가 계속 일정하게 나오지가 않아서 정말 너무 힘듭니다. 

선배님들 고수님들 조언 부탁드립니다........

#western blot
 
#actin
 
#band
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대왕개구리안재진  |  2019.07.29   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

웰청소나 샘플을 원심돌리고 soup만 걸오보셨나요?

이 2가지만 잘해도 끌림현상은 상당히 줄어들수 있습니다...

양손잡이x  |  2019.07.31    

Actin band만 그런건가요??

 

actin만 그렇다면 안티바디를 바꿔보심이 어떠신지..

 |  2019.08.01    

혹시 semi dry 방식 transfer 사용하셨나요?

membrane 과 gel 사이가 잘 contact 되어있지 않으면 가끔 저렇게 나오더라구요 

semi dry 기계 쓸 때 그 회사에서 파는 버퍼 쓰지 않고 그냥 우리가 만들어 쓰게 되면 뭔가 기계랑 안 맞는 경우가 있는 거 같아요.

그런 경우에는 무거운 책(레닌저나 스트라이어 생화학책 같은 거) 으로 좀 눌러주면 잘 되곤 했는데

밑져야 본전이니 한번 츄라이 해보세요 

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