실험 Q&A Laboratory Animals > Histology/Pathology
IHC frozen section 조직에 구멍이 납니다.
레벨1 woorame (대학원생)
고수님들 ㅠㅠㅠ 도와주세요!!!!!!
안녕하세요, 저는 IHC를 하기위해 section 연습을 하고있는 대학원생입니다.
Frozen section으로 진행을 하고있는데 section이 잘 되었는지 현미경으로 확인하면 계속해서 아래와 같이 조직에 구멍이 나있습니다.
조직은 Muscle이며, mold에 심은 후 -80도에 보관했다가 Cyosection전 -20도에서 10분 정도 온도적응 시킨 후 section을 진행하고 있습니다.
처음에는 section시 온도 문제인걸로 판단하여 -17,-18,-19,-20도씨 모두 조건 검토하였는데 그래도 결과는 똑같았습니다.
또한 현미경 촬영 전 충분히 말린 후 촬영했습니다.
혹시 아래 사항이 문제인지 싶어 기재해보았습니다.
1. 조직을 Section 후 slide glass에 붙이는 과정에서 문제가 될 만한 것은 Antiroll plate를 사용하지 않고 붙으로만 한다는 점
2. 해부 후 mold에 조직을 심을 때 isopentane이 아닌 드라이아이스에서 얼린 점
3. 박절 후 건조될 때 까지 20분정도 두었다가 드라이아이스에 보관하여 이동하였는데 혹시 건조 시간에 문제가 있는 걸까요?
위 사항이 문제가 되었을까요? 아니면 부족한 제 기술탓일까요..ㅠㅠ
동일한 경험 해보신 분들 ㅜㅜㅜ제발 답변 부탁드립니다ㅠㅠㅠ
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