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 전체 > Molecular Biology-DNA > Purification/Isolation
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질문 fixation 과정을 거친 tissue를 이용한 genotyping이 가능할까요?
알jhonnyLee(대학원생)  |  07.23 18:50

안녕하세요,

 

실험을 마친 쥐의 brain만 남기고 쥐를 sacrifice 시켰는데요

genotyping을 통해 유전형(Wild, knockout or hetro- type)을 한번 더 확인이 한번더 필요하게됐습니다.

그래서 brain 조직으로 PCR을 통해 genotyping을 진행하려합니다.

가지고 있는 brain이 harvest를 할 때, 4% PFA fixative로 fixation을 마친 후, cryosection을 위해서 OCT compound로 frozen block을 만들어둔 상태입니다.

 

여기서 질문은

1. fixation 과정을 거친 tissue를 이용한 genotyping이 가능할까요?

2. genotyping에 사용하려는 brain에 사용된 fixative, OCT compound가 DNA를 얻는데 미치는 영향은 없겠지요..?

(protein이 아닌 DNA 수준에서의 영향은 없을 것으로 추측하고 있습니다..) 

3. brain에 사용된 fixative, OCT compound를 제거한 후 genotyping을 실시해야할 것 같은데, 제거할 방법이 있을까요? (예를들어, 1X PBS에 washing을 한다던지.. )

혹시 tail이나 ear가 아닌 다른 tissue에서 DNA를 뽑아낸 실험을 해보신 경험있으신 분이 있다면, 혹은 통찰있으신 분은 조언 부탁드립니다!!

#tissue genotyping
 
#fixative
 
#PCR
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