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FSC와 count의 plot말씀하시는 것 같은데요.
옵션값에서 count 한계치를 설정하시면 됩니다. 예를들어
2만개 3만개 이렇게요. 즉, 흘려주는 시간말고 찍히는 숫자의 한계치를 잡아서 고정시키면 됩니다.
그렇게 하면 약물처리 샘플은 초당 찍히는 count 수는 적고 천천히 분석되도 peak크기는 어느정도 유사하게 가실 수 있을겁니다.
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레벨1
YLEE25
(대학원생)
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19.07.19 16:40
오!! 그렇군요. 그럼 facs 찍을 때 고정을 할 수 있는건가요?
annexin V/ PI staining해서 apoptosis 볼 때는 total counting 갯수를 10,000으로 고정해두고 찍기는 합니다!
Total count를 10000으로 이미 고정하셨다면, 혹시 분석 런타임도 고정하시나요? 1분 2분 막 이렇게요. 그렇다면 1만개 찍히기 전에 분석 런타임 셋팅해놓은 시간에 먼저 도달할 수도 있고요.
그게 아니라면 apoptosis를 보신다는거 같던데 cell이 터지면 작은 부스러기가 많이 나올거 같거든요? 이걸 detector가 다 감지할텐데 그러면 원하는 cell만이 아니라 부스러기까지 카운트에 잡히거든요. 그럼 cell size부분에는 부스러기 때문에 적게 찍히는 거에요. 이 거의 해결법으로는 FSC threshold를 높여서 정상cell 크기 부분만 카운트되도록 조절해보세요.
아니면 카운트, 분석시간 다 해제하고 cell size부분만 잡아서 gating된 부분의 카운트수를 분석할때 실시간으로 확인이 가능하니까 1만개쯤 될때 끉는 메뉴얼적인 방법도 있어요
왠지 약물처리해서 cell 터져서, 정상세포 크기의 cell수가 줄어서 피크가 낮은거 같은데..아마 후자일꺼 같네요.
안그래도 제가 요즘 미세조류 cell lysis해서 찍어보고 있거든요ㅎㅎ
제가 찍는건 그림처럼 나와요. 걷는동안 써서 ㅋㅋ