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레벨5
초보자구해줘요
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19.07.16 17:04
DNA에 의한 현상입니다. DNase를 처리해보세요.
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궁금해요
(비회원)
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19.07.17 17:51
혹시 Lab.에서 일반적으로 사용하시는 DNase 농도가 어느 정도 인지 말씀해주실 수 있나요?
DNase I을 5U ~ 20U / ml 농도로 처리하면 됩니다.
가장 간단한 방법은 pipetting을 끈적임이 없어질 때까지 수십회 반복해서 chromosomal DNA를 잘게 잘라 주는 방법입니다.
DNase I은 lysis buffer에 EDTA 혹은 EGTA를 사용하는 경우 활성이 떨어질 수 있고, SDS 나 deoxycholate가 포함된 RIPA buffer에서 최적 활성을 나타내는지는 의문이네요.
강한 detergent 없이 freeze/thaw로 세포를 깨는 경우는 사용 가능할 것으로 보입니다만, DNase I은 실험 조건을 먼저 고려한 후 선택하는 것이 맞을 것으로 생각됩니다.
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레벨2
판다의브레인
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19.07.19 21:47
원래그런거 맞습니다.
DNA 때문에 끈적거리는 겁니다.
DNA는 Backbone 자체가 당구조로 되어있어서
DNA가 많이 있으면 끈적끈적 한 젤리처럼 보입니다.
RIPA buffer로 하면 그렇게 되는 이유는
RIPA buffer는 강력한 detergent를 포함하는 버퍼라서
Nucelues membrane까지 깨버리기 때문에 Chromosomal DNA들이 노출되서 그런 현상이 나타나는 것입니다.
참고하세요
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레벨3
더잘하고싶다
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19.07.20 06:42
genomic DNA가 노출되서 나타나는 현상이고...
파이펫팅을 수십회 반복하거나 하다가 파이펫 안으로 들어갈 수 있으니
조심해서.
또는 DNase I 를 처리하거나
소니케이터로 3-5초 정도 가장 약한 세기로 지이이잉 해주면 해결됩니다..
그도 아니면 파이펫으로 건져서 버려도 됩니다.. 크로마틴에 결합된 단백질
보실 게 아니라면..