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질문 박테리아 UV에 관한 질문입니다. 도와주세요.
알BYB(일반인)  |  07.13 11:44

안녕하세요. 현재 생명과학, 화학 관련 과제연구를 진행 중인 고등학생입니다.

과제 연구를 진행 중에 있어 해결되지 않는 점이 있어 이 곳에 질문을 남깁니다.

저희 과제 연구 진행과정 중 하나가 액체 배지를 구성해서 그 배지에서  Agrobacterium sp.의 생장을 확인하는 것입니다.

보통 박테리아 피크가 600nm 정도에서 나오는 것으로 알고 있어서, 기존의 계획은 흡광도를 확인하고 비교해서 각 배지별 박테리아의 생장을 비교하는 것입니다.

하지만 이번에 UV-Vis Spectrophotometer로 찍어보니 600nm에서 피크가 나오지 않고 298nm에서 나왔습니다.

가장 기본적으로 LB 배지에서 배양한 경우, baseline을 LB 배지로 하고 solution을 박테리아가 생장 중인 액체 배지 용액으로 하였는데, 280nm 앞쪽에는 값의 변화가 굉장히 큰 직선형(석영셀의 200nm 부근에서 나타나는 셀 피크처럼)으로 나타나고 600nm에는 피크가 확인되지 않습니다.

혹시나 싶어 동결건조된 박테리아를 증류수에 바로 풀어서 찍어보았는데도 비슷한 결과가 나옵니다.

고체 배지에서 같은 조건으로 배양하였을 때 colony가 있으므로 박테리아가 생장하지 않았다고 이야기하기엔 어려운 것 같습니다.

평소에 화학 관련 용액만 UV-Vis Spectrophotometer 찍어보았고 박테리아를 확인하는 것은 처음이여서 잘 모르겠습니다.

저희가 사용한  UV-Vis Spectrophotometer 기종은 지금 인터넷 검색을 통해 확인한 결과 'UV-Vis Spectrophotometer UV-2600 from Shimadzu'와 'NanoPhotometer® NP80 Spectrophotometer, Implen'이고, 두 기기 모두 올해 구매한 것으로 알고 있습니다.

왜 피크가 600nm에서 확인되지 않는지 질문하고 싶고, 혹시 안된다면 다른 방법으로 박테리아의 생장을 확인할 수 있는 방법이 없는지 질문하고 싶습니다.

도와주세요. ㅠㅠ

#Agrobacterium sp.
 
#UV-Vis Spectrophotometer
 
#배지
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.

배양조건을 가르쳐 주시면 좋겠습니다.

올챙이단백질결정  |  07.14 09:35  

Agrobacterium sp.의 경우 KCTC에 의하면,

KCTC Media No. 108 : LB(Luria-Bertani) medium 

조성 용량 단위
 Tryptone (Difco 0123) 10.0 
 Yeast extract (Difco 0127) 5.0 
 NaCl 10.0 
 Agar 15.0 
 Distilled water 1.0 

pH 7.0

KCTC Media No. 486 : R2A+NaNO3

조성 용량 단위
 R2A    
 NaNO3 0.85  g/L

 

입니다. 따라서 저희는 LB배지에서도 배양하였고, 저희가 직접 구성한 벼 부산물 배지가 박테리아의 생장에 있어 최소 배지로서 역할을 할 수 있는지 확인하기 위해서 벼 부산물에서도 배양하였습니다. 

알BYB  |  07.16 07:26  

1. LB broth에 얼마만큼의 Agrobacterium sp. 를 접종하셨는지

2. 접종 후 몇시간마다 OD값을 측정하셨는지.

3. Agrobacterium sp. 의 배양 조건을 잘 맞추셨는지.

 

를 재확인 후 해보시면 어떨까요.

 

현재 질문해주신 내용으로는 agar plate에 spreading한 균주를 pick 해서 broth culture를 진행하셨는데 600 nm에서 읽히지 않는다라고 이해되는데요.

 

단순히 균이 덜자랐기 때문에 측정이 안된 것인지 (눈으로 봤을 때도 배양액이 뿌옇게 되어있는데 측정이안된 것인지) 등의 정보가 부족한 것 같습니다

알AIEN  |  07.18 11:49  
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