실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Western Blot
glycosylation과 WB size 바뀌는 관계
레벨1 biochobo (대학원생)
안녕하세요.
요즘 실험하고 있는 protein때문에 골머리 싸고있는 대학원생입니다.
지금 protein을 WB하고 있는데 cell lysate를 걸어보면 ab회사에서 말해주는 size에 밴드가 나타나는데 그 protein이 sup으로 secretion될 것을 예상하여
sup을 걸어보면 size가 5-10 KDa 크게 밴드가 보이고 있습니다. 더블밴드가 보이기도 하구요.. 위에께 더 크게나옵니다.
이게 좀 non-specific한 band들도 많이 보여서 원래 size에도 옅은 band가 보였는데요.. 거의 background 정도라서 아닐거라고 생각은 하고있는데..
그러면 size가 변동되었다고 생각해야 하는 것인지 아니면 없다고 생각해야하는지..
찾아보니 그 protein이 secretion될 때 glycosylation된다는 reference를 찾긴 했는데 거기서는 peptide figment가 0.98 Da 증가되었다.. 이런식으로 써있는데 그정도면 WB상에서는 size가 변동 없어야하는것 아닌가요.. 아니면 제가 잘못 이해했는지..
"increase in molecular mass of 0.98 Da over the reference size of ****(protein 이름입니다) peptide fragments"
이렇게 써있었습니다.
제가 아직 실험을 시작하고 공부한지 얼마 되지 않아서, 그리고 질량 분석이나 그런쪽은 아예 몰라서 LC-MS 분석 데이터도 볼줄 모르고..아직 많이 부족합니다.
조금 개념만 잡을수 있게 설명부탁드립니다. 감사합니다.
Bio마켓 프리미엄