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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
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질문 western blot 샘플 빠짐 ㅠㅠ
알미래짱(과기인)  |  07.10 10:42
첨부파일 파일첨부: 샘플빠짐.pdf (242 KB)

안녕하세요 ㅠㅠ

웨스턴 블랏은 수백번했었는데 이쪽 랩으로 옮기고는 계속 이런현상이 나타나서 문의드립니다ㅜㅜ

사진에서 표시된 빨간색부분을 보시면

gel running 하기 전인데 샘플이 빠지듯한 현상이 계속 관찰됩니다,,,

 

혹시 이 원인과 해결 방안에 대해 아시는 분이 계실까요..?

 

#western blot
 
#sds gel
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채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

gel과 casting plate사이에 틈이 생겨서 sample이 빠져나오는 겁니다.

gel은 만들어 사용하나요 아니면 구매해서 사용하나요?

대왕개구리SPEED  |  07.10 11:11  

만들어서 사용하고 있습니다!ㅠㅠ

한두번만들어본것도 아닌데 ㅠㅠ 그럼 틈이 생기는 원인은 어떤것이 있을까요?ㅜㅜ

알미래짱  |  07.10 13:39  

gel을 만들어 냉장 보관 후 사용할 때 몇번 경험했던것 같습니다.

반드시 보관했다고 생기는 것은 아니고 case by case인거 같습니다.

gel plate를 깨끗이 세척 및 건조 후 사용전에 70% EtOH를 사용하여

킴와이프 등으로 잘 닦고 사용해 보세요. 

대왕개구리SPEED  |  07.10 14:27  

유리판과 Gel 사이가 들떠서 생기는 현상입니다. 이유는 여러가지가 있지만 대체로 다음과 같을 수 있습니다.

1) 유리판이 잘 닦이지 않아 뭔가 유기물이 묻어있는경우 (지문, 비눗기 등등)

2) seperatory gel 위에 넣었던 Isoprpanol이 충분히 제거되지 않은경우 (초보자들보다는 숙련자들이 더 많이 저지르는 실수입니다. 실험이 완전히 몸에 배서 사소해보이는 과정이 슬슬 귀찮아질 때 쯤 일어나는 현상이죠ㅋㅋ)

3) comb 제거 후 well에 남아있는 gel 찌꺼기나 monomer 등을 정리 할 때 washing bottle 로 너무 세게 쏘아 물리적으로(?) gel과 유리판 사이가 들뜬경우

4)만들어둔 gel을 오랫동안 방치하거나, 냉장과 room temp. 사이를 오가며 gel이 미세하게 수축된경우.

...뭐 등등이 있겠네요.

묵은지  |  07.12 13:20   
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