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wash 하실때 centrifuge 하시죠? rpm은 어느정도인가요?
3000 rpm 이상이면 튜브 바닥에 고이 모일텐데요.
1000 p pipet으로 조심히 buffer을 제거하는 수 밖에 없습니다.
그리고 저는 IP할때 (western을 하든 kinase assay를 하든) total cell lysate 750 ug에다가 bead slurry 50 uL, 그리고 Ab 1 ug을 넣었습니다.
buffer제거시 loading tip(일명 코끼리 팁)을 suction기에 꼽아서 사용해 보세요,
bead가 딸려오지 않고 잘 제거됩니다.
60mm dish에는 cell 양에 따라 다르겠지만 1ug의 antibody, 40ul의 protein A bead 50% slurry를 사용합니다..^^
Sup.을 제거 할때 완벽히 100%제거 하려고 하시니까 bead가 딸려 올라 가지 않나 싶네요..
3000 rpm에서 15초 정도 돌려준후에...
sup을 100% 제거 한다고 생각치 말고 90%정도 씩만 제거 한다고 생각하고 3-5번 washing을 하세요.. 그리고 마지막은 100%제거 한다고 생각하시고요...