실험 Q&A Laboratory Animals > Animal Models
flox/+를 가지고 homozygous (flox/flox) 마우스 만들기 중 궁금증
레벨2 kidarime (과기인)
LoxP-Cre를 이용한 knockin mouse model을 만드는 중입니다. 마우스모델 일은 처음이라 진행 중에 궁금한 점이 생겨 질문을 남깁니다.
한쪽 allele에만 loxP와 돌연변이 site를 갖는 flox/+ (hetero) 마우스를 교배하여 flox/flox (homo)를 얻고자 하였습니다. 아래 그림과 같이 최종 목적은 cre마우스와 교배하여 knockin 모델을 만드는 것이구요.
3마리 females로 부터 총 31마리의 자손을 얻을 수 있었는데, 처음 예상은 멘델리안 법칙에 따라 {WT (25%) / flox/+ (50%) / flox/flox (25%)} 7마리 정도의 homo (flox/flox) 자손을 얻을꺼라 예상했습니다.
그런데 genotyping 결과 (PCR과 enzyme cut 이용), 6 WT (19.4%), 10 hetero (32.3%)만 얻을 수 있었고 나머지15마리 (48.4%)는 PCR로 밴드가 전혀 관찰되지 않는 결과 (no mutation site?)를 보여줬습니다.
교배한 쥐는 한쪽 allele에 mutation site가 있어 enzyme cut을 하면 #41번과 같이 3 bands로 나옵니다. 만약 mutation site가 없다면 (WT) #34과 같은 1밴드, 그리고 homo라면 젤 윗밴드는 없고 아래 2밴드만 보여져야합니다.
왜 이런 결과가 나오는 지, 그리고 가능한 일인건지 알고 싶습니다.
참고로 Breeding은 서로 다른 암컷에서 태어난 암수를 사용하였습니다.
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