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Bacteriophage 에 감염되어 lysis가 일어나서 그렇습니다.
일반적으로 DH5a 는 T4 phage 저항성이긴 하지만 문제가 생길 수 있고, BL21 같은 건 감수성이라 더 문제가 됩니다.
흔히 겪는 문제는 아니지만 실험실 환경에 phage 가 있다는 것이므로 동일한 문제가 발생할 수 있어 근본적으로는 향후 사용하는 competent cell 을 phage 저항성으로 바꾸는 것이 필요합니다.
다만 단순히 클로닝해서 플라스미드 DNA를 얻어 다음 단계로 넘어간다면, 배양시간을 10시간 이하로 짧게 하고 대신 배양량을 늘려 필요한 균체량을 확보하시면 됩니다.
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레벨1
실험하는꽁냥이
(대학원생)
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19.07.06 11:08
답변감사합니다.
어제 현상 확인 후 재 Cell Culture시, 이전에 실수로 ampicillin을
넣지않았을 때 문제 없이 실험이 된적이 있어서 ampicillin을 넣지 않고
Cell Culture을 진행하였는데 실험이 문제 없이 잘 진행되었습니다.
그러나, ampicillin이 문제라고 하기에는 agar 배지 상에서는 문제가 없어서
혹시 이 과정에서 phage 의심을 해볼 수 시약이나 장소가 있을까요??
현재, 벡터는 T-Blunt 입니다.
도와주셔서 감사합니다:)
- 원래는 cell들이 튜브 아래에 침전되어 있어야 정상인데
: 배양 중에 shaking하지 않나요?
shaking하면 cell이 가라앉지 않을건데 rpm에 약하든지 tube 배양 각도에
문제가 있을수도 있습니다.
그리고 vector가 들어간 균은 항상 항생제를 넣고 배양해야 합니다.
사진처럼 균이 보이는 것은 항생제하고는 아무런 관계가 없고 phage하고도
관계가 없습니다.
배양 중 shaking만 정확히 하면 실같은 것이 생기지 않을 겁니다.