실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > Purification/Isolation
DNA precipitation & 260/230
레벨1 알루미늄 (과기인)
안녕하세요.
현재 곰팡이에서 10ug 이상의 DNA를 추출하고 있습니다.
추출과정은 막자사발과 액체질소를 이용해서 상품화 된 kit 을 이용하고 있습니다. 이후 phenol:chloroform:isoamyl alcohol을 이용해 한 번 더 purification을 하였습니다. -> 실험상 고농도의 상태좋은 DNA가 필요하기 때문에 이 과정을 한번 더 추가했습니다.
nano drop 확인 시 260/280 = 2.0, 260/230=2.4
DNA추출 후 RNA의 오염을 확인하기 위해 gel을 사용하였으며 결과 몇개의 샘플에서 RNA오염을 확인했습니다. 따라서 이 RNA를 제거하기 위해 한번 더 RNase A (10mg/ml) 를 10ul 가한 뒤, 37도에서 약 1시간 incubation한 뒤 100%에탄올 precipitation 하여, 70% 에탄올로 워싱한 후 DNA를 추출하였습니다.
nano drop 확인 시 260/280=1.8, 260/230=1.2 였습니다!
260/230의 값이 2.0 정도가 되어야 하는데 너무 낮아 샘플로 사용할 수 없습니다.
무슨 이유때문에 두번째 RNase 처리 후 260/230 값이 저리 낮아지는지 모르겠습니다. 또한 RNA 오염을 방지하기 위한 다른 방법이 있을까요? 현재는 RNase A (10mg/ul) 15ul를 사용하고 있습니다.
답변 부탁드립니다. 감사합니다!
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