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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
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질문 western blot band/ background 문제
알zzi(대학원생)  |  06.25 14:58

웨스턴 실험 결과가 지금까지 매우 잘 나왔습니다
그런데 갑자기 결과가 안나오기 시작하는데 이유를 모르겠습니다

1차 항체, 2차 항체 재사용하며 모두 5월~6월에 만들었고,
버퍼도 대량제조하여 사용하는데 그동안 문제 없었습니다.

같은 조건으로 실험을 진행하며,

예를 들어, actin, bcl-2 같은 mambrane 사용하고 가운데 잘라서 각각 항체 붙였어요
근데 actin은 나오고 bcl-2는 아예 까맣게 나옵니다(밴드도 없이요)

이런경우도 있고 아예 membrane이 하얀 백지로 찍히기도 합니다(밴드 없어요)ㅠㅠ

1차 항체 문제인가 싶은데 저번주만해도 결과 잘 나왔구요

2차 항체 문제인가 싶은데 같이 사용하는 actin이랑은 또 잘 나와요...

그래서 항체 문제는 아닌것 같고, 버퍼도 같은 버퍼 계속 사용했으니 문제가 아닌것 같은데..

결과 찍을때 카메라 고정값?도 손댄적없어요.. 항상 셋팅된 그대로 입니다!

도대체 뭐가 문제일까요ㅠㅠ

#western
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.

항체를 밀크나 BSA에 희석해서 사용하나요?

제 의견은 항체 희석액에 세균이 살아서 즉 상해서 그런것 같습니다. 특히 2nd는 문제 없다고 하니 1st항체 상태를 확인해 보세요.

금개구리안재진  |  06.25 15:01  

안재진님, 답변 감사합니다

1차 항체에 BSA를 섞어 사용하는데 그럴수도 있겠네요
항체를 다시 만들어 사용해보겠습니다.

혹시, 밴드가 안나온 membrane들을 stripping하여 새 항체를 붙여 사용해도 될련지 궁금합니다

알zzi  |  06.25 15:30  
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