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질문 항균실험
올챙이레야(대학원생)  |  06.23 16:04

항균실험으로 paper disc와 MIC를 진행하고있습니다.

MIC가 배양 전 후 흡광도 찍었을 때, 0에 가까운 값이 나온 농도를 말한다고 알고있습니다.

실험 할 때, 96 well plate에 대조군으로 균과 증류수(항균물질을 희석할 때 멸균증류수로 희석하여 증류수를 넣었습니다)를 1:1로 넣었고, 실험군으로는 균과 시료 농도(25, 50, 75, 100%)를 1:1로 넣었습니다. 

대조군은 배양 전  0.038 -> 배양후 0.045,

실험군은 배양 전 0.592 -> 배양후 0.590 이렇게 나타나는데,

대조군과 실험군 모두 차이가 0.00n 밖에 안납니다,,,, 이렇게 나오는게 맞는건가요? 아니면 배지를 따로 넣어줘야하는 걸까요?

또 MIC는 실험결과값이 소수점 둘째, 셋째자리는 큰 차이 없다고 볼 수 있나요?? 

#mic
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

MIC측정은 microplate에서 측정하는 실험법이 아니라 tube dilution method

를 사용하여 tube에서 측정하며 shaking하여 균이 가장 잘자라는 조건에서

측정해야 정확한값의 측정이 가능합니다

간이적으로 microplate에서 측정한다고 하더라고 실험군과 대조군의

0시간 OD값은 동일하게 나와야 합니다.

현재값은 대조군 0.038, 실험군 0.592로 동일 균수 접종이 잘못되었습니다.

그리고 1 : 1로 혼합하면 배지가 희석하여 균의 성장에 문제가 발생합니다.

따라서 항균물질을 배지에 녹여서 사용하는 것을 권장합니다.

멸균수에 녹여서 사용하려면 살제 사용농도 보다 진하게 녹여 배지에

넣었을 때 배지 희석이 최대한 안되게하는 것이 좋습니다.

정확한 MIC 측정을 위해 문헌을 한번 찾아보세요..

상당히 많은 문헌이 인터넷에 있습니다.

(출처:https://en.wikipedia.org/wiki/Minimum_inhibitory_concentration)

upload_image

대왕개구리SPEED  |  06.23 16:37  

답변 감사합니다.

대조군과 실험군의 흡광도 값이 같아야한다고 하셨는데, 접종하는 균 농도는 동일하게 넣고 있으며, 제가 시료로 사용하는 분말 자체의 색이 있기 때문에 여과를 해도 대조군 값과 2배 이상의 차이가 보입니다... 분말 색이 크게 차지하는데, 색을 제거하고 실험해야하는 건가요?? 

올챙이레야  |  06.24 09:40  

대조군 1개 및 실험군 4개의 실험 전 OD값을 측정할때 시료의 색때문에

흡광도에 간섭을 받을 경우는 시료 1개 당 실험 부피 + 1ml를 만들어

흡광도 측정 시 균 접종 후 1ml를 micro tube에 넣어서 13krpm, 5분 원심분리 후

배지를 제거하고 멸균 배지 1ml를 새로 넣어 균체를 풀어서 흡광도를 측정하면

시료에 의한 간섭을 제거할 수 있습니다.

이렇게 하는 것은 tube에서 MIC를 측정할 때 가능하고 microwell에서는 vol이

적어서 힘들겁니다.

대왕개구리SPEED  |  06.24 10:53  
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