[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보  |  e브릭몰e브릭몰 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
웨비나 모집
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2
전체보기 안전점검 논문교환 LABox
 전체 > Molecular Biology-Protein > Expression/Purification
조회 306  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 induction이 시간이 지날수록 줄어들 수도 있을까요?
올챙이클레엉(대학원생)  |  06.18 18:13

안녕하세요? 단백질을 뽑기 위해서 single colony selection을 진행중에 있습니다. small scale 에서 실험을 진행중인데요, IPTG final concentration 0.4mM로 해서 od600이 0.6일때 IPTG를 넣고 1시간부터 3시간까지 쭉 샘플을 얻고 젤을 내렸는데, 1시간에서는 induction 된 밴드가 보입니다만 2시간, 3시간 샘플에서는 induction 밴드가 사라지거나 줄어든채로 보입니다. 시간이 흐를수록 induction 된 양이 줄어드는경우도 있나요??

#단백질
 
#발현
답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.

대장균 등 생명체는 한정된 자원으로 가장 효율적인 생명활동을 해야합니다.

자연계에서 섭취할 수 있는 양분들 중 어떤 것 하나를 만나면 그것을 소화할 수 있는 효소들을 합성하지만 그렇지 못한 양분의 소화에 관련된 효소들은 합성을 억제합니다.

대표적인 예가 Lac operon입니다. 효율적인 단백질 합성을 위해서지요.

IPTG induction은 대장균이 평소에는 5 copies 정도 합성하던 lac operon효소를 3,000배(mRNA 기준) 더 합성하도록 강제하는 과정입니다.

갑자기 엄청난 양의 단백질을 합성하려면 당연히 평소에 합성하던 효소생산은 줄여야하며 그 결과 세포분열도 크게 줄어들 수 밖에 없습니다.

induction을 천천히 하도록 온도를 낮춰주거나 IPTG 농도를 크게 낮추지 않으면 제한된(?) 양분때문에 induction 되는 효율은 점차 떨어지게됩니다. 원래 기질인 lactose는 분해되서 없어지지만 IPTG는 분해되서 없어지는 것이 아니므로 양분이 고갈되서 세균이 죽는 그 순간까지 induction을 해야하는 거지요.

그래서 종종 IPTG induction을 장시간하면 induction된 단백질이 줄어드는것처럼 보입니다. 

IPTG induction실험에서 소위 "조건을 잡는다"는 것은induction할때의 세균 OD600 값, IPTG 농도, induction 온도 등을 여러가지로 해 보고 induction 시간도 30분, 1시간, 2시간 6시간 12시간... 머 이렇게 여러 조건으로 해 봐서 가장 좋은 induction 조건을 사용하지요.

대왕개구리강시  |  06.18 22:29  
답변하기
할인행사 광고 검색광고
글로리바이오텍 글로리바이오텍
GBTsol ICA- Immune Cell Analyzer런칭 이벤트 (10.31까지)
싸토리우스코리아바이오텍 싸토리우스코리아바이오텍
피펫 3+1 & 구매 인증샷 이벤트 (10.31까지)
외부제휴사 광고 AD
e브릭몰
βeta
4/6  좌우
286,700
82,800
121,700
218,200
130,00065,000
286,700
123,900118,000
231,000219,000
56,70054,000
144,900138,000
286,700
668,600334,000
180,700172,000
50,50048,000
137,600131,000
286,700
286,700
79,80076,000
49,700
113,500108,000
286,700
107,200102,000
231,000219,000
101,90097,000
최근등록   더보기 >
멸균배지 만들때   08.26
ssDNA와 RNA의 차이점,,.?   08.25
유전자 가위에 대해 궁금한 것이 있습니다.   08.25
멸균배지 만들기   08.25
resin의 capacity를 구하려고 합니다   08.25
Vector 농도관련해서요...   08.25
미세먼지가 동물의 미치는 영향에 대해 실험을 하고 싶어요   08.25
전기영동 실험 중 연기   08.25
특정 식물에 특정 성분의 함량이 어느정도인지   08.24
세균을 이용한 미세플라스틱 분해 가능성??   08.24
Springer Nature
투표진행
Q. Cell line 배양시 FBS 제조사마다 차이가 있다고 생각하시나요? 동물세포 배양에서 특별히 요구되는 FBS가 아니고 실험자가 많이들 사용하는 셀라인의 경우 제조별 FBS가 세포 배양에 영향을 미칠까요? 물론 제조사의 endotoxin의 level은 같다라고 가정하고 질문을 드립니다.
참여하기
제품평가
[코넥스트]
TDZyme (Collagenase)
코넥스트
모집인원: 25명
모집기간: ~8/30까지
신청조건: Collagenase를 이용하여 조직으로부터 세포를 분리하는 실험을 수행하는 연구자
평가자 혜택

- 참가자 전원 5만원 상품권 제공
- 우수평가자 5명에게 10만원 상품권 추가 제공

제품평가자 모집중
ZEUS
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ  |  실험 문의 및 제안
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의 member@ibric.org
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS