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질문 induction이 시간이 지날수록 줄어들 수도 있을까요?
뒷다리클레엉(대학원생)  |  2019.06.18 18:13

안녕하세요? 단백질을 뽑기 위해서 single colony selection을 진행중에 있습니다. small scale 에서 실험을 진행중인데요, IPTG final concentration 0.4mM로 해서 od600이 0.6일때 IPTG를 넣고 1시간부터 3시간까지 쭉 샘플을 얻고 젤을 내렸는데, 1시간에서는 induction 된 밴드가 보입니다만 2시간, 3시간 샘플에서는 induction 밴드가 사라지거나 줄어든채로 보입니다. 시간이 흐를수록 induction 된 양이 줄어드는경우도 있나요??

#단백질
 
#발현
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리강시  |  2019.06.18   

대장균 등 생명체는 한정된 자원으로 가장 효율적인 생명활동을 해야합니다.

자연계에서 섭취할 수 있는 양분들 중 어떤 것 하나를 만나면 그것을 소화할 수 있는 효소들을 합성하지만 그렇지 못한 양분의 소화에 관련된 효소들은 합성을 억제합니다.

대표적인 예가 Lac operon입니다. 효율적인 단백질 합성을 위해서지요.

IPTG induction은 대장균이 평소에는 5 copies 정도 합성하던 lac operon효소를 3,000배(mRNA 기준) 더 합성하도록 강제하는 과정입니다.

갑자기 엄청난 양의 단백질을 합성하려면 당연히 평소에 합성하던 효소생산은 줄여야하며 그 결과 세포분열도 크게 줄어들 수 밖에 없습니다.

induction을 천천히 하도록 온도를 낮춰주거나 IPTG 농도를 크게 낮추지 않으면 제한된(?) 양분때문에 induction 되는 효율은 점차 떨어지게됩니다. 원래 기질인 lactose는 분해되서 없어지지만 IPTG는 분해되서 없어지는 것이 아니므로 양분이 고갈되서 세균이 죽는 그 순간까지 induction을 해야하는 거지요.

그래서 종종 IPTG induction을 장시간하면 induction된 단백질이 줄어드는것처럼 보입니다. 

IPTG induction실험에서 소위 "조건을 잡는다"는 것은induction할때의 세균 OD600 값, IPTG 농도, induction 온도 등을 여러가지로 해 보고 induction 시간도 30분, 1시간, 2시간 6시간 12시간... 머 이렇게 여러 조건으로 해 봐서 가장 좋은 induction 조건을 사용하지요.

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