[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보  |  e브릭몰e브릭몰 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
웨비나 모집
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2
전체보기 안전점검 논문교환 LABox
 전체 > Molecular Biology-Protein > etc.
조회 193  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 Hydroxyproline assay 관련 질문 드립니다.
알평창군꽃등심(과기인)  |  06.18 17:18

안녕하세요. 저희 연구실에서 Collagen 함량(순도) 테스트를 하기 위해 Hydroxyproline assay를 하고 있습니다.

sample은 Fish skin에서 collagen을 추출하여 TFF 필터 후 동결 건조한 collagen 을 사용하였고, Hydroxyproline assay결과 100mg collagen 에서 2mg의Hydroxyprolin(2%) 함유 되어 있다는 결과가 나왔습니다.

실험 방법은 100mg collagen을 6N HCl에 녹인 후 autoclave하여 sample로 사용 하였고 Oxidant Sol. , Ehrlich's Sol. 각각 500ul씩 사용 하여 흡광도 체크 하였습니다. Standard도 매 실험마다 다시 잡고 하고 있구요. 

다른 논문 및 자료들을 봤을때 collagen (type 1)에는 10~13%의 hydroxyproline이 함유 되어 있다고 하는데 실험 결과 수치(2%)가 너무 낮아서 문의 드립니다...

#Hydroxyproline
 
#Collagen
답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

- 100mg collagen을 6N HCl에 녹인 후 autoclave하여 sample로 사용 하였고

: 위의 방법에서 hydroysis 시간은 어느정도 하고, 충분히 hydrolysis가 되는

조건인지 method validation이 되어있는 방법입니까?

아마도 collagen hydrolysis가 많이 되지 않았을 겁니다.

 

대왕개구리SPEED  |  06.18 17:26  

protocol 상 120℃ 3시간 heating하여라 라고 적혀 있어서 autoclave의 time설정을 3시간으로 변경하여 사용하였습니다. Standard 발색 및 흡광도 커브가 잘나왔고 수치가 낮다는 것은 hydrolysis가 덜 되었다고 봐야 되는 건가요?

알평창군꽃등심  |  06.18 17:44  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

1. 현재 제조한 콜라겐 함량 자체가 낮을 경우 Hyp 함량이 낮게 나올수 있지만

이 가능성은 낮을 것 같습니다.

2. acid hydrolysis 조건은 110도 24시간에서 145도 4시간 사이입니다.

120도, 3시간은 아마도 많이 부족할 겁니다.

STD가 잘 나온다는 것은 assay에는 문제가 없으니까 아마도 시료 내

free-Hyp 함량이 낮아서 그런것 같으며 acid hydrolysis 조건 문제가 아닌가

합니다.

acid hydrolysis 조건에 대한 validation을 해봐서 99% 이상 hydrolysis가 일어

나는지 확인 후 실험에 적용해야 할 겁니다.

대왕개구리SPEED  |  06.18 17:51  
답변하기
할인행사 광고 검색광고
글로리바이오텍 글로리바이오텍
GBTsol ICA- Immune Cell Analyzer런칭 이벤트 (10.31까지)
싸토리우스코리아바이오텍 싸토리우스코리아바이오텍
피펫 3+1 & 구매 인증샷 이벤트 (10.31까지)
외부제휴사 광고 AD
e브릭몰
βeta
6/6  좌우
231,000219,000
56,70054,000
668,600334,000
107,200102,000
286,700
180,700172,000
50,50048,000
286,700
286,700
137,600131,000
286,700
218,200
231,000219,000
79,80076,000
130,00065,000
286,700
286,700
82,800
121,700
144,900138,000
123,900118,000
113,500108,000
49,700
101,90097,000
최근등록   더보기 >
특정 식물에 특정 성분의 함량이 어느정도인지   08.24
세균을 이용한 미세플라스틱 분해 가능성??   08.24
RNA extraction 후 장시간 (6시간) 65도에 노출되었는데, 사용가능할까요?   08.23
Anion exchange chromatography 하기 전   08.23
단백질 정량 . 흡광도   08.23
Polystyrene 용기 -80도 보관 가능한가요?   08.23
YEME 배지 조제 질문입니다.   08.23
pCambia 1302 vector 내에 있는 하이그로마이신   08.23
peptide와 반응하는 단백질 찾기   08.23
면역 염색하려고하는데,, antibody 사용 관련해서 질문드려요   08.23
Springer Nature
투표진행
Q. Cell line 배양시 FBS 제조사마다 차이가 있다고 생각하시나요? 동물세포 배양에서 특별히 요구되는 FBS가 아니고 실험자가 많이들 사용하는 셀라인의 경우 제조별 FBS가 세포 배양에 영향을 미칠까요? 물론 제조사의 endotoxin의 level은 같다라고 가정하고 질문을 드립니다.
참여하기
제품평가
[코넥스트]
TDZyme (Collagenase)
코넥스트
모집인원: 25명
모집기간: ~8/30까지
신청조건: Collagenase를 이용하여 조직으로부터 세포를 분리하는 실험을 수행하는 연구자
평가자 혜택

- 참가자 전원 5만원 상품권 제공
- 우수평가자 5명에게 10만원 상품권 추가 제공

제품평가자 모집중
ZEUS
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ  |  실험 문의 및 제안
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의 member@ibric.org
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS