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 전체 > Molecular Biology-Protein > Expression/Purification
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질문 speed님 혹은 expression고수님들 봐주세요
올챙이단백질결정(대학원생)  |  06.14 17:37

Rosetta cell은 외래 유전자의 대장균 내 발현 효율을 올리기 위하여

7개의 rare codon을 위한 tRNAs를 별도의 plasmid에서 생산합니다.

이 plasmid가 Rosetta cell에 들어있는  pRARE2이며 chloramphenicol 내성을

가집니다.

따라서 Rosetta cell을 배양 시 pRARE2를 위해서 chloramphenicol, 그리고

발현 vector를 위한 항생제 등 총 2종의 항생제를 넣고 실험해야 합니다.

 

이런 답변을 들었습니다. 그치만 pRARE2가 chloramphenicol내성을 가지기는 하지만 chloramphenicol을 안넣어도 안죽는건 마찬가지이므로 발현량이 증가는 하지 않지 않나요? 

#expression
 
#harvest
 
#protein
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.
클로람페니콜을 넣지 않으면 Rosetta 균주를
사용할 의미가 없습니다.
BL21(DE3)와 비슷한 결과가 나오겠죠..
대왕개구리SPEED  |  06.14 18:05  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

pRARE2 plasmid는 chloramphenicol 마커를 가지고 있어서 Rosetta를 배양할때 chloramphenicol을 넣어줍니다.

실제로 테스트를 해 보면 pRARE2 plasmid는 chloramphenicol을 넣지 않아도 대장균 내에서 잘 유지되기는 합니다. 게다가 이 플라스미드의 origin이 p15A origin이라서 copy 수가 15 정도로 낮기 때문에 chloramphenicol을 넣지 않아도 plasmid 유지에는 큰 상관 없습니다.

그러나 chloramphenicol이 없는 배양환경에서는 자연적으로 curing 현상이 나타나는 경우가 있는데, 이는 일부 대장균의 pRARE2가 없어진다는 것입니다.

그렇게 되면 pRARE2가 클론의 유전자 발현에 필요한 경우에는 발현효율이 조금씩 감소할 수도 있는 상황이라는 거죠.

그래서 귀찮더라도 rosetta에 chloramphenicol을 넣어주는게 좋습니다.

대왕개구리강시  |  06.14 21:11  
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