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질문 cell counting하는 방법이 이해가 잘 안가요..ㅠㅠ
알quddlsms(과기인)  |  06.14 15:16

cell counting하는 방법이 이해가 잘 안갑니다.

인턴으로 들어온지 얼마안된 학생입니다. 

총 4칸을 counting했을 때, 132개가 나왔습니다.

 

upload_image→ 66*10^4cells/ml(100pi)이 나왔습니다.

upload_image이 총 volume이 되도록 100pi dish에 깔아주기 위해서는

200*10^4 / 66*10^4 = 3.03.....이 나왔습니다.

그래서 100pi dish하나에 보통 media를 10ml씩 넣잖아요..

그래서 기존의 counting했던 예전 media에 cell이 담긴 튜브에서 3ml을 취해서 100pi에 주입해주고, 나머지 volume인 7ml을 넣어주어서 총 10ml volume을 만들어서 incubator에 넣어주었습니다.

이게 맞는지, 아니면 어디서 잘 못된건지 짚어주실 수 있으실까요...??

cell counting하는 것이 실험실마다 조금씩 다르다는 글을 본적이 있어서.. 제가 어디서 잘 못한건지 모르겠습니다..ㅠㅠ

 

#cell counting
 
#Hemocytometer
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.

1. 4 squares counting에 1/2을 곱해준 이유는?

2. cell counting이 맞다면 10ml를 media 7ml + cell 3ml로 하면 됩니다.

- cell counting하는 것이 실험실마다 조금씩 다르다는 글을 본적이 있어서..

: hemocytometer 규격은 전세계 공통이며 counting method가 다를수가

없습니다.

대왕개구리SPEED  |  06.14 15:50  

우선 SPEED님 답변 감사드립니다.

4칸인데 1/2를 곱해준 이유

trypan blue와 cell을 1:1로 dilution해서 hemocytometer에 넣었기 때문에 dilution한 만큼 2를 곱해주었고,

hemocytometer의 2칸 중에 한 칸을 사용했기 때문에 1/2을 곱해주고,

4칸을 세아렸기 때문에 평균값을 계산하기 위해서 1/4를 곱해주었습니다.
upload_image

이렇게 생각하고 계산했는데 혹시 틀린건가요??ㅠㅠ

알quddlsms  |  06.14 16:00  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

설명도 틀리고 계산식도 틀린데 결과값은 맞게했네요..

cell counting 방법

1. 4칸의 총 cell을 계산

2. (총 cell * 1/4) * 희석배수 * 10,000 / ml

따라서 (132 * 1/4) * 2 * 10,000 / ml

= 66 * 10^4 / ml 입니다.

희석배수 2를 곱하고 1/2 * 1/4가 아니라 희석배수 * 1/4입니다.

 

대왕개구리SPEED  |  06.14 16:12  

제가 아직 많이 부족한데

자세한 설명과 좋은 가르침 감사합니다!!

알quddlsms  |  06.14 17:33  

1/2 희석했으니까 희석배수 2곱하고

4칸 말고 2칸 세면 

 

1/2*2*(counting한 cell수)*10^4cell/ml 하면 편하지요

세포맨  |  06.17 17:54   
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