실험 Q&A Mol. Biol.-RNA > Purification/Isolation
RNA Extraction 이 잘 안됩니다.
레벨2 행운13 (과기인)
cell에서 RNA를 추출하기 위해 kit를 구입 후
protocol 대로 할려고 하는데 생각보다 잘 안되네요.
안되는 과정은 cell을 lysis 처리 후
chloroform을 처리 하고 원심분리로
3개의 층으로 나뉘었는데(맨아래유기용매층, 중간의 흰색 반 고체층, 상층의
투명한 RNA가 포함되어 있다고 알려진 층)
원래라면 그 이후 맨 상층을 옮겨 isopropanol에 해당하는
binding buffer와 섞어준뒤 상층액을 column에 통과시켜
준 뒤 70%에탄올에 해당하는 washing buffer와
100% 에탄올에 해당하는 다른 washing buffer로
RNA를 Column위에 침전 시키고 마지막에 이걸 elution buffer로
녹여 RNA를 수거하는 방식이지만
제가 할땐 , chloroform으로 층 분리는 되는데
그 이후 isopropanol처리 후
RNA의 분리(isopropanol의 작용)가 일어나지 않습니다.
어디서 잘못된 걸까요?
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