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 전체 > Molecular Biology-RNA > Purification/Isolation
조회 187  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 RNA Extraction 이 잘 안됩니다.
올챙이행운13(과기인)  |  06.12 20:30

cell에서 RNA를 추출하기 위해 kit를 구입 후

protocol 대로 할려고 하는데 생각보다 잘 안되네요.

 

안되는 과정은 cell을 lysis 처리 후

chloroform을 처리 하고 원심분리로

3개의 층으로 나뉘었는데(맨아래유기용매층, 중간의 흰색 반 고체층, 상층의

투명한 RNA가 포함되어 있다고 알려진 층)

 

원래라면 그 이후 맨 상층을 옮겨 isopropanol에 해당하는

binding buffer와 섞어준뒤 상층액을 column에 통과시켜

준 뒤 70%에탄올에 해당하는 washing buffer와

 

100% 에탄올에 해당하는 다른 washing buffer로

RNA를 Column위에 침전 시키고 마지막에 이걸 elution buffer로

녹여 RNA를 수거하는 방식이지만

 

제가 할땐 , chloroform으로 층 분리는 되는데

그 이후 isopropanol처리 후

RNA의 분리(isopropanol의 작용)가 일어나지 않습니다.

어디서 잘못된 걸까요?

#RNA
 
#isolation
 
#extraction
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
그럭저럭한 purity + 높은 수득률을 원하신다면 kit 사용하지마시고 conventional 하게 얻어보세요

아무리해도 kit보다는 conventional 방식이 훨씬 잘 뽑힙니다
purity는 kit로 뽑는게 제일입니다
알연구원나부랭이  |  06.13 11:09  
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