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질문 pH에 따른 효소 작용 Gel electrophoresis 실험
알coca123(과기인)  |  06.10 04:31
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DNA(pGL3-Basic), Cutsmart Buffer(10x), hind3, BamH1, D.W를 넣고 각각 HCl, D.W, NaOH를 넣었습니다. 그리고 37도에서 30분 incubation을 했고, Gel electrophresis를 했습니다. 

 

이 실험에서 2조에서 밴드가 하나만 나왔는데 이유가 뭔가요?

그리고 6조에서 1번의 결과는 왜 안 나왔을까요?

4조와 6조의 결과값이 왜 다른걸까요?

2조와 6조의 3번 결과에서 2조는 왜 위에 몰려있고, 6조는 밑으로 다 내려온걸까요?

참고로 환경, 조건 다 같았습니다.

 

살려주세요... 

#겔 전기영동
 
#ph에 따른 효소 반응
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.

pGL3는 대략 4.8kb 크기죠.

BamHI과 HindIII로 자르면 약 2kb와 2.8kb로 분리됩니다.

6조 2번을 보세요.

약 2kb와 3kb 근처의 밴드와 그보다 큰 희미한 밴드가 보이죠. 그 두 밴드가 BamHI과 HindIII로 잘랐을때 나와야 하는 밴드입니다.

맨 위의 희미한 밴드는 두 효소 중 하나에만 잘린 single cut 밴드입니다. partial cut이라고 보통 말합니다.

저런 한 효소로만 잘린 밴드가 나오는 것은 효소가 적게 들어갔거나 DNA가 너무 많은 양이거나 기타 다른 조건이 맞지 않아서일 것입니다.

4조 3번, 2조 2번은 역시 partial cut에 의한 single cut 밴드입니다.

2조 1과 3은 안잘린 밴드입니다.

 

제힌효소 처리에서, 제한효소별로 buffer가 다른 이유는 적정 효소반응조건의 salt 농도와 온도, 그리고 pH가 필요하기 때문입니다.

또한 DNA도 pH에 따라서 denaturation되버리면 제한효소가 자르지 못하는 경우가 발생합니다. 특히 low pH에서는 DNA가 depurination되기 때문에 제한효소가 자르지 못할 뿐만 아니라 DNA가 조각조각 나버려서 없어집니다. 아마 4조1번과 6조 1번이 그런 경우라보 생각됩니다.

대왕개구리강시  |  06.10 08:24  
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