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 전체 > Molecular Biology-Protein > Extraction/Isolation
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질문 western blot 정량
올챙이thduddl(과기인)  |  06.08 17:05

western blot 정량 질문드립니다.

cell line 별로 동일한 수로 seeding 후 정량하였는데,

세포별로 자라는 속도가 달라 bca 정량시 차이가 많이 났습니다.

몇개의 cell line이 bca standard OD 값을 넘어가는 샘플들이 있어 넘어가는 샘플은 1/2 로 dilution하여 다시 측정하고 계산하고 실험을 진행하였습니다. (dilution factor *2 곱함)

그리고 동일한 양의 단백질 양을 (ug) 로딩하였는데, 액틴간의 차이가 많이나서 질문드립니다.

diluton을 샘플간에 다르게해서 이런 문제가 발생한것인지..

이론상으로는 계산시 dilution factor를 곱해줘서 동량 로딩됬다고 생각했는데, 제가 생각을 잘못한것인지..

고수님들 답변부탁드립니다. 감사합니다.

#western blot
 
#bca 정량
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채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

먼저 셀 라인별로 actin을 볼때 셀 라인별로 엑틴 발현율이 서로 틀리지 않을까요?

이게 같다고 생각하고 실험을 진행하셨는데... 상호 비교가 처음부터 틀리는 가정을 했었어야 합니다.

금개구리안재진  |  06.10 12:48  
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