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질문 Picogreen 정량법에서 차이가 나요ㅠㅠㅠ
뒷다리영빙구(과기인)  |  05.30 18:33

Picogreen을 통해서 dsDNA를 정량하고 있는데 한가지 이상한 현상이 생겨서 물어보려고 여기에 올립니다ㅠㅠ

 

다름아니라 Standard관련 내용인데

본래 protocol에는 kit에 포함된 lambda DNA를 사용하라고 나와있는데, 그것뿐만 아니라 human gDNA도 사용이 가능할 듯 하여 기계 테스트겸 standard를 측정해 봤는데 '람다DNA'와 'human gDNA'간에 차이가 너무 심하더라구요

혹시 이거에 대해 아시는 고수님들이 있을까요??ㅠㅠ

#DNA quantification
 
#picogreen
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채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

kit에 포함된 lambda DNA는 표준 정량된 DNA입니다.

human gDNA를 표준 정량된 것을 사용했나요?

대왕개구리SPEED  |  05.30 18:46  

네 직접뽑은 것도 아니고 gDNA를 구매해서 샀어요

 

근데 이렇게 되네요 ㄷㄷ

 

혹시나해서 gDNA 정보남길께요!!

https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/roche/11691112001?lang=ko&region=KR

뒷다리영빙구  |  05.30 19:14  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

측정 농도가 어떻게 되나요?

원래 비슷하게 나옵니다.

 

대왕개구리SPEED  |  05.30 19:20  

비슷하게 나올텐데 좀 차이가 많이나네요 ㄷㄷ

 

일단 농도는 1000/100/10/1/blank(ng/ml)로 진행했습니다!

뒷다리영빙구  |  05.30 19:35  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

hgDNA는 희석을 어떻게 했습니까?

예를 들어 얼마 희석한 gDNA를 각각 시약과 혼합해서 측정했나요?

대왕개구리SPEED  |  05.30 19:53  

lambda DNA(100 ug/ml)와 hgDNA(0.2 mg/ml)을 2 ug/ml stock solution으로 만들었고 이 stock solution으로 1000/100/10/1/blank를 각각 500 ul 씩 만들어서 진행 하였습니다(in TE buffer)

+처음에 stock solution만드는것을 제외하면 전부 동일하게 진행되었습니다. 굳이 차이라면 lambda DNA를 조금더 일찍만든거 정도입니다

뒷다리영빙구  |  05.31 09:11  
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