실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
qPCR 실험을 하고있는 학생입니다!
레벨1 리삭 (대학생)
현재 대학교에서 qPCR실험을 맡아서 하고있는 학생입니다.
다름이아니라 qPCR 실험에 있어서 난항을 겪고있는 부분이 있어 질문드립니다.
제가하는 qPCR실험은 일반인을 reference로 한 gDNA를 control로 사용하여 duplication, deletion환자의 gene expression을 확인하는 것입니다.
melting curve를 보면 원하는 target 에서의 증폭이 이루어지지 않고 target보다 낮은 온도에서 peak이 형성되고 원하는 부분에서도 peak이 형성되어
double peak 형태를 보입니다. product 사이즈는 150bp이고 reference로 하는 primer는 house keeping gene으로 하고있습니다.
이전 실험했던 선배들의 자료를 보면 이정도의 dimer로 추정되는 peak이 형성된적이 없는데 methods, materials, protocol 모두 같은 것으로 사용하고 있는데 도저히 이유를 모르겠어서 질문드립니다
nonspecific binding site에 의한 것이라면 프라이머를 다시 제작하라는 답글이 많은것 같은데 몇년째 같은 서열의 프라이머를 사용한 실험이고 프라이머 제작하는 정제방법도 바뀌지 않았다고 합니다.
qPCR 실험 선배님들의 조언 부탁드립니다..
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