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 전체 > Molecular Biology-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
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질문 PCR 결과 분석해주세요
알마라(과기인)  |  05.20 20:44

형질전환된 대장균을 PCR 돌린 후 전기영동 시킨건데

DNA증폭이 잘 되었는지 무슨 문제점이 있는지 분석해주세요

upload_image

dH2O 9.175ml
dNTP(25mM) 2ml
buffer 1.5ml
DNA 2ml(E.coli DNA)
primerF 0.5ml
primerR 0.5ml
Taqpolymerase 0.125ml
---
Total 15ml

#PCR
 
#전기영동
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채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

ml가 ul아닌가요?

cloning 확인 용 insert를 증폭한 것이면 잘 나온것 같습니다.

별로 문제점은 없어 보입니다.

대왕개구리SPEED  |  05.20 21:13  

ul 맞아요 잘못썼네요..

그런데 어떤걸 보고 잘 된건지 알 수 있을까요

(실험 처음해본 초짜라 지식이 많이 부족해요ㅜㅜ)

알마라  |  05.20 22:27  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

전기영동은 전기영동 각각의 목적이 있습니다.

그 중에서 PCR product의 전기영동은 아래 항목을 확인하면 좋을 것

같습니다.

1. PCR target product외의 비특이 product가 없는지 확인

- 첨부 파일에서 비특이 product는 없는것 같고 primer 및 PCR 반응이

적절하게 진행된 것 같습니다.

2. 제일 밑에 있는 band는 PCR 반응 후 남아있는 primer이기 때문에

product 확인용 PCR에서는 별 문제가 되지 않고 cloning용 PCR에서는

PCR product 정제 kit를 사용하면 제거 가능합니다.

3. 전기영동 band가 가능하면 수평으로 내려가면 좋습니다.

band가 휘어진다든지 수평이 되지 않으면 gel이 균일하게 만들어 지지 않은

경우, 전기영동 전압이 강해서 빨리 내린경우이기 때문이지만 첨부 파일은

전기영동에서도 별 문제가 안보입니다.

4. band를 dectection했을 경우 최대한 gel은 검은색으로 보이며 band만

보이면 좋은데 첨부 파일에서도 band만 보이며 gel은 최대한 어둡게

보이므로 DNA 확인 용 형광 dye를 적당하게 사용한것 같습니다.

대왕개구리SPEED  |  05.21 00:21  

님의 숙제를 왜 우리더러...? 왜 부끄러움은 우리 몫인가?

BU  |  05.25 10:47   
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