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 전체 > Molecular Biology-Protein > Expression/Purification
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질문 효소 활성 측정
알해징(대학원생)  |  05.18 19:28

효소 활성을 측정하고 있는 대학원생입니다.

처음 하는지라 시행착오 끝에 결과를 얻긴 했습니다.

50배 희석한 샘플 OD 값이 0.128 , blank 값이 0.095가 나왔습니다.

그리고 스탠다드 커브가 y=0.0194x+0.0625, r2=0.9978가 나왔습니다.

키트에 있는 계산법은 샘플값-blank값/slope*희석배수를 하면 umole 값이 나오고 60분 동안 반응시킨 샘플이라 60으로 나누어 주어서 73.1 umole/min 이라는 값을 얻었습니다. 제가 헷갈리는 부분은 이 부분입니다! 제가 찾아본 결과 사용한 단백질양이나 정제했으면 총 단백질 양으로 나누라고 했는데 제가 정제한 단백질의 양은 3.19mg/ml 였고 저는 샘플을 만들때 10 ul를 사용했습니다. 그럼 10 ul의 양의 0.032 mg 으로 나누어 주어야 하는지 아니면 그냥 총 단백질 양인 3.19 mg/ml로 나누어 주어야 하는지가 헷갈립니다! 아시는 분 도와주시면 감사하겠습니다ㅠㅠㅠㅠㅠㅠㅠ

 
#효소활성
 
#단백질 정제
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

assay에 사용한 효소액이 10ul면

ml 당 활성을 나타낼 경우 100X하면 되고 mg당 활성을 나타낼 경우 31.35를

곱하면 됩니다.

 

대왕개구리SPEED  |  05.18 21:34  

31.35는 어디서 나온 값인지 알 수 있을까요??ㅠㅠ

알해징  |  05.20 09:25  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

assay에 10ul 효소액을 사용했다면..

효소 mg당 활성은 10ul = 31.9ug, 1000ug/31.9ug = 31.35를 곱하면 됩니다.

대왕개구리SPEED  |  05.20 10:39  
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