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질문 미생물 SEM 전처리 과정에 대해 궁금합니다..ㅠㅠ
알studyresearch(일반인)  |  2019.05.14 15:27

안녕하세요

이번에 처음으로 SEM 전처리를 진행하게 되었습니다..ㅠㅠ

효모를 동결건조 한 후와 broth에서 배양된 후의 상태를 SEM으로 찍어보려고 합니다.

broth에 배양한 효모는 원심분리 후 cell만으로 진행하려고 하고, 동결건조 후는 YPD배지나 생리식염수에 풀어서 하려고 합니다..ㅠㅠ

논문이랑 특허등 찾아봤는데

첫번째로, 고정,탈수 과정에 사용되는 용액의 부피가 자세히 써있지 않고 시간정도만 ㅆㅓ있더라구요..ㅠㅠ

용액의 양은 상관이 없는건가요? 보통 몇 정도를 사용하는지가 궁금합니다..ㅠㅠㅠ

두번째로는, 탈수과정에 Ethanol을 농도별로 순차적으로 진행한다 라고 알고있는데, 한가지 농도에서 약 15분간 탈수를 진행하면 원심분리로 제거한 후 새로운 농도의 Ethanol을 첨가하여 탈수를 하는 것인지 궁금합니다..ㅠㅠ

#SEM
 
#미생물
 
#전처리
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
11  |  2019.05.15    
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

1. 용액의 양은 크게 관계없습니다. 넉넉히 사용하시면 됩니다. 저는 주로 400~800ul정도를 사용합니다. 용액이 부족하면 200ul정도만 사용해도 충분할 것 같습니다.

 

2. 저 같은 경우는 pellet의 양과 상태를 보고 결정합니다. 양이 넉넉하거나 상태가 좋으면 원심분리로 sup을 덜어내는데, 그런 경우가 아니라면 pellet을 풀지 않고 반응만 시킨 후 그대로 sup을 덜어냅니다. 원심분리를 하지 않을때는 반응시간을 조금 더 잡고 갑니다. 원심분리를 높은 rpm으로 자주 돌리면 아무래도 세포의 형태가 변할 수도 있습니다

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