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cloning 시 사용하는 vector와 insert의 정제는 불순물 종류에 따라
권장하는 정제방법이 달라집니다.
1. vector
- 1 cut해서 사용하는경우
: EtOH 침전만으로 사용가능, gel elution해도 무방
- 2cut해서 사용하는 경우
: 짧은 2cut 단편을 제거하기 위해 gel elution을 권장
2. insert
- vector에서 잘라내어 사용하는 경우
: gel elution을 권장
- PCR 증폭으로 사용하는 경우
: 비특이 band가 없는 경우는 PCR 정제 kit를 사용하여 미량 남아있는
primer와 buffer 교환.
: 비특이 band가 일부 있는 경우는 gel elution하여 target band만 정제하는
것을 권장.
만일 벡터나 insert를 제한효소롤 잘랐을때 잘려서 나오는 작은 DNA 조각이10 bp 정도라면 그냥 PCR purification kit를 사용합니다.
왜냐하면 PCR purification kit의 메뉴얼을 읽어보면 kit의 레진에 결합해서 정제할 수 있는 DNA의 크기범위가 나옵니다. 너무 작은 DNA는 레진에 결합했다가 wash 단계에서 제거되기 때문에 마지막으로 elution된 것은 작은 DNA 조각을 포함하지 않습니다.
물론, 이 방법은 벡터나 PCR product를 잘랐을때 잘려져 나온 불필요한 DNA 조각이 클 경우에는 적용하지 못합니다.
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레벨1
hooo
(과기인)
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19.05.14 15:03
감사합니다~!!