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 전체 > Molecular Biology-DNA > Purification/Isolation
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질문 dna 추출에서 왜 260nm를 280nm로 나눈 값이 1.8-2.0사이어야 순도가 높나요?
알ㅇㅇㅈ(과기인)  |  05.11 15:37

제목 그대로 입니다. 각 파장의 의미도 알겠고 실험 원리도 이해했는데 저부분이 이해가 안되네요. dna 추출에서 왜 260nm를 280nm로 나눈 값이 1.8-2.0사이어야 순도가 높나요? 제 질문의 요점은 1.8-2.0사이라는 수치입니다.

#dna 추출
 
#260nm/280nm
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

260/280 에서 핵산의 농도는 260 에서 가장 높고 단백질 같은 물질은 280 에서 가장 흡광이 높게 나옵니다. 또 연구자들이 실험적 경험을 해보니 그 비율이 1.8 정도일때 순도가 가장 높게 나온다는것을 알게 되어 그 수치를 사용힙니다.

금개구리안재진  |  05.13 09:49  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

저도 그 수치는 실험자들의 경험에서 나온 수치로 알고 있습니다.

참고로, Nanopore sequencing library 제작 메뉴얼에는 다음과 같이 나와있습니다.

o We recommend that sample DNA has a 260/280 ~ 1.80 and a 260/230 ~2.0-2.2.
o A 260/280 which is higher than ~1.8 indicates the presence of RNA.
o A 260/280 which is lower than ~1.8 can indicate the presence of protein or phenol
o If the 260/230 is significantly lower than 2.0-2.2 indicates the presence of contaminants, and the DNA may need additional purification.


참고하세요.

아웃사이더  |  05.13 11:36   

단백질에 포함되어 있는 aromatic ring(흡수파장 280nm)과

핵산에 포함되어 있는 aromatic ring(흡수파장 260nm)이 흡수하는 파장이 각각 다릅니다.

정확한 것은 유기화학적인 지식이 요구 됩니다. 간단히 설명드리자면 aromatic ring에 포함되어 있는 π결합이 특정한 파장의 빛을 흡수하기 때문에, 흡광도를 측정하여서 단백질 또는 핵산을 구분할 수 있는 것입니다.

그래서 isolation 후에 흡광도를 읽어서 그 차이가 약 1.8배~2배가 나오면 순도가 높다고 판단하는 거지요.

왜냐, 단백질이 포함되어 있을수록 분모값이 커지면 1.8보다 값이 작아질 것이고 그에 따라 "아, 이 product에는 핵산보다 단백질 함량이 높구나" 라고 알 수 있고 따라서 "순도가 낮구나"라고 판단하게 되는 겁니다. 

 

반대로,  단백질이 적게 포함되어 있어, 분모값이 작아지면 1.8-2 사잇값으로 계산이 될 것이고 따라서 "아, 이 product에는 단백질 함량이 적구나"라고 알 수 있고, 결론적으로 "순도가 높구나"라고 판단할 수 있습니다.

 

여기서 단백질은 DNA를 둘러싸는 히스톤 단백질 같은 DNA구조 유지에 필요한 필수적인 단백질을 의미하는 것이 아닙니다.

cell 등에서 핵산을 isolation하게 되면 기타 불필요한 단백질도 어쩔 수 없이 포함되어 있기 마련이지요.

그래서 완벽하게 DNA만을 isolation할 수 없고,

히스톤과 같은 DNA 구조에 필수적인 단백질을 어느 정도는 포함했지만 불필요한 단백질 없이 잘 isolation 되었다면 흡광도 차이가 1.8-2배 차이가 나게 되는 겁니다.

 

RNA  |  05.15 09:24   
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