실험 Q&A Mol. Biol.-RNA > mRNA Analysis
qRT-PCR 결과에서 amplification plot에서의 이어진 선이 혹시 PCR이 안 된 것일까요?
레벨1 칮켘 (대학원생)
안녕하세요
이번에RNA에 DNase I처리 후, cDNA를 합성하여 qRT-PCR을 진행하였습니다.
amplification plot이 처음엔 끊어진 것 처럼 선이 보이다가 나중에 선이 이어진 형태가 되는 것이 일반적인 모습이라고 알고 있습니다.
그런데 제가 한 실험에서 두 sample이 처음부터 연속적으로 이어져있는 선을 보이고 있는 데, 그 두 sample의 melt curve를 보면 2개 모두 한개의 피크를 띄고 있습니다.
유사한 bric 질문에 대한 대답에선 PCR이 제대로 된 것 같지 않다고 하기도 하는데, melt curve도 잘 뜨고 Ct값도 (1plate안에서 같은 sample로 2반복을 줌) 다른 반복과 거의 차이를 보이지 않습니다. 그래서 PCR은 잘 된 것 같기도 하면서 약간의 의문점이 남아 이렇게 질문을 남깁니다.
혹시 저렇게 선이 뜨면 안되는 건지 ( 그 전과 비교한 밝기에 따른 plot이라고 하니까.. 상관 없을 것만 같다는 생각이 들긴 합니다만..),
신뢰 할 수 있는 결과 값으로 판단 해도 될까요?? 저 plot에서의 선 모양으로 (삐죽삐죽하거나 이어진 선)이 크게 의미하는 점이 있을까요??
잘 못 알고 있는 점이 있다면 고쳐주시면 정말 정말 감사하겠습니다 ㅎㅎㅎ
+ RNA 추출 후에 DnaseI을 처리, 그리고 합성한 cDNA를 가지고,
SYBR green으로 실험하고 있습니다.
Bio마켓 프리미엄