실험Q&A를 통해 여러분의 지식을 나누어 주세요. 답변을 등록하시려면 로그인 해주세요.
본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
gel %는 product 크기에 따라서 다르게 전기영동 해야합니다.
100bp ladder는 현재 gel 농도보다 높은 농도에서 전기영동 해야 band가 정확히 보입니다.
첨부 사진을 보면 500, 300bp 정도로 보입니다.
-
레벨3
윈터윈드
(과기인)
-
19.04.25 12:33
이 template DNA의 크기가 180bp인데, 이런 결과가 나올 수 있나요? insert DNA가 삽입된 template도 있다고 해요.
1.5%~2% gel에서 template DNA와 PCR product를 같이 전기영동 해보세요.
-
레벨3
윈터윈드
(과기인)
-
19.04.25 17:24
이게 수업 때 실험한 내용이라 부차적인 실험을 할 수가 없습니다. 혹시 180bp 크기의 DNA가 저 위치에 나올 수 있는 경우가 있을까요?
아무리 마커가 흐리게 잘안보여도 180bp는 아닙니다.
-
레벨3
윈터윈드
(과기인)
-
19.04.25 17:57
그렇다면 밴드가 2개 만들어진 게 설명이 안 되지 않나요? 진한 밴드가 insert DNA가 있어 180보다 큰 크기로 나왔다면 그 위의 연한 밴드는 뭘까요?
만약 아래 band가 target이면 위의 band는 비특이 band로 봐야겠죠..
PCR에서는 비특이 band가 언제든지 나올 가능성이 있습니다.
어떤 band인지는 염기서열 분석을 해보지 않으면 정확히 알수가 없습니다.
-
레벨3
윈터윈드
(과기인)
-
19.04.25 19:59
상세히 설명해주셔서 감사합니다.
한 가지만 더 물어보고 싶은데, 비특이 band가 나올 가능성이 많나요? 저 band를 형성한 sample의 조성은 똑같아서요... 그리고 비특이 band가 어떻게 나오는지도 좀 알려주시면 감사하겠습니다.
비특이 band가 나올지 예상하기는 힘듭니다.
PCR을 하는 모든 연구자들은 primer 디자인을 목적에 맞게 디자인하고 비특이 증폭이 일어나지
않도록 신경을 씁니다.
비특이 band가 나오는 이유는 annealing temp.부터 annealing time, template DNA의 purity 등
여러가지 입니다.
비특이 band가 나오면 PCR 조건을 보고 개선하는게 가장 좋습니다.