안녕하세요. 연구실에서 인턴생활을 하고 있는 학부생입니다. 기초적인 부분이지만 아직 부족한점이 많아서 이렇게 질문드립니다. 

이번에 실험을 맡게되면서 trypan blue로 염색을 해서 cell counting을 하게 됐습니다. 여태 연구실 선배님들은 실험실에서 trypan blue를 사용하지 않으셔서 trypan blue 사용 관련해서 문의드립니다. ㅠㅠ 

1. 구글링을 해 보니 보통 trypan blue 를 1:1로 희석하여 나중에 cell counting 시 (희석비 * 2)를 해서 곱해주던데 왜 그렇게 계산을 하나요?

만약 trypan blue 1:2로 희석을 했을 때, 

cell 수 / # of squres * 10^4 * ( 2 * 2 )로 계산을 해 주어야 하나요? 

2. 보통 cell counting 시 cell을 푼 현탄액을 미디아에 1/10으로 희석합니다. 

90μl Media + 10μl 현탄액 으로 희석한 후  10μl 를 따서 cell counting을 합니다. 그래서 마지막에서 희석배를 곱해주는데,

10μl cell 현탄액 에 10μl trypan blue를 1:1로 넣고, 

20μl 의 섞은 걸 다시 80μl 미디아에 희석하면 

마지막에 cell counting 할때 

squre 당 평균 cell 수 * 10^4 * 2 * 5 로 계산하면 될까요?

희석하지 않고 trypan blue에만 염색하기엔 cell 수가 너무 많아서요 ㅠㅠ 

답변부탁드립니다.