실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
second PCR
레벨2 rhksdn (대학원생)
안녕하세요.
DNA를 연구소재로 가지고 있는 대학원생입니다.
시료가 귀해서 1st PCR 후 나온 product를 이용하여 2nd PCR을 진행하여 증폭하여 사용하려고 하고 있습니다.
그런데 1st 후 결과가 잘 안나온 product를 template로 사용하고 동일한 primer를 이용하여 PCR했을때는 증폭이 잘 되었습니다.
그런데 1st 후 결과가 잘나온 product를 template로 사용하여 second를 했을때 증폭이 하나도 안되는 결과가 나왔습니다.
second PCR이 nested pcr을 이용해 primer를 본래 primer 보다 앞쪽으로 제작하는 것으로 알고 있으나 그냥해도 가능하다고 알고 있어서 진행하여 실험을 진행하였습니다.
그런데 1차에서 잘 증폭된것이 2차에서 안된 이유를 좀 처럼 찾아봐도 알 수 가 없어서 질문드립니다.
1차 2차 pcr 조건은 전부 동일하게 진행하였습니다. template만 달라졌습니다.
선배님들의 조언을 부탁드립니다.
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