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primer working을 하지 않는다는게 어떤식으로 안되는건지 알려주세요
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지나가는사람
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19.04.05 17:10
아무리 오래된 시약이라도... 약간 working 수준이 떨어지긴 하지만~
오래된 시약을 사용해도 별 탈 없이 잘 나옵니다....
다음과 같이 해보세요~
stock 농도 또는 sample 양을 좀 더 늘려서 실험 진행해보세요~
그리고 위에 선생님께서 말씀하신 방법에는 전혀 문제가 없습니다.
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레벨5
초보자구해줘요
(대학원생)
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19.04.05 17:24
working이 안됬다는 것은 제가 srebp1c를 adenovirus를 통해 overexpression시킨 후 rna를 추출했습니다.
이 후 qpcr을 했는데 srebp-1c의 발현은 증가하지 않았지만 해당 target genes(positive control)의 발현은 증가하였습니다(약 8 fold).
때문에 저는 primer가 working하지않았다고 판단했습니다.
그래서 제가 하는 방법을 하나하나 되짚어보는 중입니다.
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레벨5
초보자구해줘요
(대학원생)
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19.04.05 17:25
primer의 농도를 높여서 qpcr에 사용하면 다른 gene의 primer의 농도보다 높아지게되는데 상관없나요??
제 생각에는 qpcr에 사용하는 모든 gene에 해당하는 primer의 농도를 맞춰서 사용해야할것같은데요 ㅠㅠ
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레벨5
지나가는사람
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19.04.06 11:12
모든 실험은 동일하게 진행햐아되는것은 맞습니다.
하지만, 시약의 문제라던가 방법에 문제가있을 경우,
원인을 찾기위해 다방면으로 테스트해보는 것이 좋다고 생각합니다.
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레벨5
지나가는사람
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19.04.06 11:13
아니면,
srebp1c를 adenovirus를 통해 overexpression시킨 후 rna를 추출했습니다.
이 방법에서 실패를 했을 가능성도 있지 않을까요?
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레벨5
초보자구해줘요
(대학원생)
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19.04.09 15:04
다시 하나하나 살펴보면서 해봐야겠네요 ㅠㅠㅠ
답변감사합니다!