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사용 vector와 insert를 몇 ug이나 사용하나요?
vector band가 희미하게 보인다면 전체적으로 DNA양을 적게 사용하는것
같습니다.
V + I는 양이 적을 때 보다 많을 때가 상대적으로 실험에 성공할 확률이
높습니다.
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레벨2
sing777
(대학원생)
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19.04.05 12:37
Vector 50ng 사용합니다 insert는 1:3 비율 해서 15ng정도 사용하였구요... ligation 후 일단 형질전황 하엿는데 ㅠㅠㅠ
ligation 후 전기영동 확인은 vector 50ng을 전부 사용했나요?
저의 경우 100개 이상의 gene을 cloning 했지만 최소 vector양을
200~ 300ng을 사용합니다.
ligation 상태는 전기영동 사진을 가지고 확인하는게 정확합니다.
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레벨2
sing777
(대학원생)
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19.04.05 13:05
Ligation 후 vector 50ng을 모두 사용한다는게 이해가 되질 않습니다 ㅠ 혹시 ligation 후에 모두 gel에 걸어야 한다는 말씀인지요? vector 농도가 효소 처리시 많이 낮아져서 ligation 할때 최소 5ul 정도들어가서 volume 조절이 힘들어서 어쩔수 없었구요 ㅠ
Ligation 후 전기영동 하여 사진 확인하였을때에 vector band만 보이고 insert및 다른 band는 안보였습니다..
실험은 단계 별로 정확히 확인한 후 진행하는게 시간도 절약하고 시약도
절약할수 있습니다.
ligation mixture를 1회 실험양의 3배인 60ul를 만들어 20ul는 바로 냉동
보관, 40ul를 ligation하여 20ul를 냉동보관한 시료와 전기영동합니다.
전기영동 확인 후 남은 20ul를 TF하면 됩니다.
그리고 vector를 먼저 purity높게 어느정도 양이 되게 준비를 해야합니다.
vector 준비가 잘 안되는데 계속 cloning한다고 잘 진행이 될수가 없습니다.