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먼저 vector를 확인해 보세요..
어떤 vector를 사용하는지 모르겠지만 보통 plasmid prep.하면
band가 진하게 나옵니다.
1. vector 효소 무처리
2. vector 효소처리(-ligation)
3. vector 효소처리(+ligation)
1, 2, 3을 동일양 TF해서 나온 colony가
1번 100개라고 하면
2번 5개 이하
3번 95개 이상
위의 조건으로 vector가 준비되면 22도 ~ 25도에서 3시간 ligation 한 후
ligation mixture(ligation 전)과 ligation mixture(ligation 후)를 전기영동으로
확인해 보면 60% 이상 ligation된 것을 확인할 수 있습니다.
ligation 확인 후 남은 ligation 시료를 TF하면 됩니다.
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레벨2
sing777
(대학원생)
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19.04.03 16:11
답변 감사합니다 16도 o/n 했었는데 25도 상관 없을까요? Blunt end여도 괜찮를런지...
16도에서 아예 안되는 것은 아닙니다..
하지만 ligation 후 전기영동으로 한번은 확인해 보세요..
ligation이 잘되는지..
A. vector + insert ligation 전
B. vector + insert ligation 후
A와 B를 전기영동 해보면 확실히 ligation이 잘되는지 확인가능합니다.