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아웃사이더
(비회원)
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19.03.28 12:15
A. niger의 포자에서 genomic DNA를 뽑았을 때 사용한 방법입니다.
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1. 포자현탁액을 filter paper나 paper towel로 걸러서 포자만 얻어내고, 여분의 물기를 제거함 (완전히 말리지는 않았음).
2. 포자 0.5~1g 정도를 액체질소를 이용해서 고운가루로 파쇄함.
3. 파쇄된 포자가루중 0.1g을 2mL tube에 분주함 (녹지않도록 주의필요).
4. GeneAll Exgene Plant SV mini kit을 이용하여 genomic DNA를 추출함.
http://www.geneall.com/goods_detail.php?goodsIdx=564&Showno=0
- 단, PL buffer를 600uL, RNaseA solution은 7.5uL 처리함.
- 나머지는 메뉴얼 내용 그대로 따름.
5. 추출량: (Qubit PicGeen assay QC 결과)
- 농도: 26 ~ 40ng/uL
- 총량: 2.3ug ~ 3.6ug
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주의사항으로는 포자에서 나온 검은색 색소로 인해 마지막에 elution된 genomic DNA 용액이 약간 검정색을 띕니다. 따라서 혹시 NGS 나 3세대 sequencing용이라면 0.7X AMpure XP bead를 이용한 추가 정제가 필요합니다.
도움이 되셨는지 모르겠네요.
좋은 결과 얻으세요.