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실험 순서에 대하여 조교가 적어준 protocol에 70%를 먼저 넣으라고 되어
있나요?
miniprep.방법이 여러가지가 있어서 어떤 방법으로 했는지 모르겠네요.
어떤 순서로 실험을 진행했는지는 모르겠지만...
주로 마지막 단계에서 에탄올은 DNA 침전을 위한 것입니다.
에탄올 처리 후 원심분리하면 DNA가 tube의 아래쪽으로 모이게되고
상층의 에탄올을 제거하고, 남은 에탄올 제거를 위해 실온에서 잠시 건조 후
DNA를 다른 보존용액에 녹여서 취하게 됩니다.
실험 중 시약을 넣는 것은 이유가 있어서입니다.
에탄올도 넣을만한 이유가 있으니 넣는거죠.
DNA는 수용액 중에서 적당량의 salt와 적당농도의 에탄올이 있으면 급격히 용해도가 떨어져서 침전됩니다.
가령 DNA가 70% 에탄올 속에서는 용액으로 존재합니다.
그러나 salt가 첨가되면, 가령 Na+나 K+, Mg2+ 등이 첨가되면 용해도가 0 이 됩니다.,
DNA를 침전시킬때 3M sodium salt를 1/10 부피 첨가하고, cold absolute 에탄올을 두 배 부피 첨가하죠. 그러면 에탄올 농도는 대략 70%가 됩니다. 이때 DNA는 침전합니다.
원심분리로 상등액을 제거하고 다시 70% 에탄올을 첨가하면 DNA 침전중에 있는 과량의 salt가 씻겨나가서 salt 농도가 크게 줄어듭니다.
이런 이유로 70% 에탄올 어쩌고 하는 이야기가 나오는 거지요.
DNA가 침전되는 조건은
1. 적정 % 이상의 극성 유기용매
- EtOH 70% 이상, iPA 50% 이상
2. DNA의 pgosphodiester bond에 있는 Pi(-)에 결합 가능한 1가 양이온
- Na+, K+, Li+ 등
Mg2+는 DNA에 결합하지 못합니다.