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 전체 > Molecular Biology-RNA > Purification/Isolation
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질문 Trizol RNA 추출시 purity 개선~??
알파란하늘이(과기인)  |  2019.02.27 23:49


안녕하세요.

Trizol로 균주에서 RNA를 추출하고 있습니다.

추출후 정량을 해보면 A260/280 = 1.35~1.60 정도 측정됩니다.

여러번 시도해도 유사한 결과가 나오내요.

어떤 방법으로 purity를 높여야 할까요~??

또, 정량농도는 약 100~150 ng/ul 정도 추출됩니다.

RNA 양과 Purity를 높일 수 있는 방법이 있을까요~?

RNA 추출 키트를 사용해 추출하면 Purity는 A260/280 = 1.85~2.0 정도로 적정하게

나오는데 양이 너무 적습니다. 

추출양과 purity 개선을 모두 충족해야 합니다.

경험 있으신분 답장 주시면 감사하겠습니다.








#RNA 추출
 
#Trizol
 
#purity 개선
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  2019.02.28   

TRIZOL 추출

- RNA 농도는 cell농도에 의존

- Purity : TRIZOL 처리 후 ice에 20~30분 냉각 후 13krpm, 15분 이상 원심분리

원심분리 후 sup의 max ~70%만 회수

SPIN column 추출

- RNA 농도는 cell 농도 및 elution 시 37도 15~20분 incubation 후 elution

그리고 총 elution vol.을 2회로 나누어 elution 

개구리A'ANE  |  2019.03.04   

Trizol을 이용한 Phase separation방법은 Phenol성분 contamination때문에 높은 순도의 RNA를 추출하기가 어렵습니다.


kit방식을 사용했을때 RNA추출이 적게 된것은Lysis문제일 가능성이 높습니다. Trizol의 경우 강력한 Lysis능력으로 이런 부분을 극복하게 됩니다.


문제를 해결 할 방법은 두가지가 있습니다.


첫번째는 기존방법을 고수하되, 문제가 일어난 부분을 해결하는것입니다. 예컨대 Trizol 추출의 경우 이후 RNA Clean & concentrator같은 Clean up kit를 사용하여 순도를 높이는 방법과, kit추출의 경우 Kit사용전 Bead beater등을 이용해 확실한 Lysis이후 RNA를 추출하는 것이지요.


두번째는 두 방식의 장점을 합친 제품을 사용하는겁니다.
Direct-zol(http://www.kyongshin.com/productview.php?pd_id=96)이라고 미국 zymo사제품인데 Trizol샘플에서 RNA를 Column을 이용해 층 분리 안하고 추출하는 겁니다. 물론 Washing과정에서 Phenol성분은 제거되구요.

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