[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보  |  e브릭몰e브릭몰 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
웨비나모집
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2 배너3
전체보기 안전점검 논문교환 LABox
 전체 > Molecular Biology-RNA > Purification/Isolation
조회 701  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 Trizol RNA 추출시 purity 개선~??
알파란하늘이(과기인)  |  02.27 23:49


안녕하세요.

Trizol로 균주에서 RNA를 추출하고 있습니다.

추출후 정량을 해보면 A260/280 = 1.35~1.60 정도 측정됩니다.

여러번 시도해도 유사한 결과가 나오내요.

어떤 방법으로 purity를 높여야 할까요~??

또, 정량농도는 약 100~150 ng/ul 정도 추출됩니다.

RNA 양과 Purity를 높일 수 있는 방법이 있을까요~?

RNA 추출 키트를 사용해 추출하면 Purity는 A260/280 = 1.85~2.0 정도로 적정하게

나오는데 양이 너무 적습니다. 

추출양과 purity 개선을 모두 충족해야 합니다.

경험 있으신분 답장 주시면 감사하겠습니다.








#RNA 추출
 
#Trizol
 
#purity 개선
답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.

TRIZOL 추출

- RNA 농도는 cell농도에 의존

- Purity : TRIZOL 처리 후 ice에 20~30분 냉각 후 13krpm, 15분 이상 원심분리

원심분리 후 sup의 max ~70%만 회수

SPIN column 추출

- RNA 농도는 cell 농도 및 elution 시 37도 15~20분 incubation 후 elution

그리고 총 elution vol.을 2회로 나누어 elution 

대왕개구리SPEED  |  02.28 00:02  

Trizol을 이용한 Phase separation방법은 Phenol성분 contamination때문에 높은 순도의 RNA를 추출하기가 어렵습니다.


kit방식을 사용했을때 RNA추출이 적게 된것은Lysis문제일 가능성이 높습니다. Trizol의 경우 강력한 Lysis능력으로 이런 부분을 극복하게 됩니다.


문제를 해결 할 방법은 두가지가 있습니다.


첫번째는 기존방법을 고수하되, 문제가 일어난 부분을 해결하는것입니다. 예컨대 Trizol 추출의 경우 이후 RNA Clean & concentrator같은 Clean up kit를 사용하여 순도를 높이는 방법과, kit추출의 경우 Kit사용전 Bead beater등을 이용해 확실한 Lysis이후 RNA를 추출하는 것이지요.


두번째는 두 방식의 장점을 합친 제품을 사용하는겁니다.
Direct-zol(http://www.kyongshin.com/productview.php?pd_id=96)이라고 미국 zymo사제품인데 Trizol샘플에서 RNA를 Column을 이용해 층 분리 안하고 추출하는 겁니다. 물론 Washing과정에서 Phenol성분은 제거되구요.

개구리A'ANE  |  03.04 10:43  
답변하기
할인행사 광고 검색광고
마크로텍 마크로텍
Ezscope Nikon 현미경 마이크로톰 특가판매 (12.30까지)
엠피바이오메디칼스코리아 엠피바이오메디칼스코리아
샘플파쇄 단 40초! 비드호모게나이저 특별할인행사: 가격할인+사은품 증정 (12.31까지)
외부제휴사 광고 AD
e브릭몰
βeta
1/6  좌우
107,200102,000
137,600131,000
123,900118,000
231,000219,000
56,70054,000
130,00065,000
180,700172,000
286,700
79,80076,000
82,800
231,000219,000
49,700
144,900138,000
121,700
286,700
113,500108,000
668,600334,000
286,700
286,700
286,700
286,700
218,200
101,90097,000
50,50048,000
최근등록   더보기 >
갑자기 궁금한데 여기 나이대가 어떻게 될까요   10.14
난각막에서 콜라겐 에탄올 추출   10.14
RT-PCR 프로토콜   10.14
MRS broth 제조 시 pH 조성   10.14
곰팡이 질문   10.14
5M NaOH   10.14
mouse 위 염증 지수 질문.   10.14
노르말 농도계산에 대해서 궁금합니다.   10.14
구강상피 세포 염색 실험을 했는데요   10.14
전기영동 할 때 loding dye하고 DNA를 섞을때 색깔이 왜 loding dye 색일...   10.14
동일바이오테크
투표진행
Q. 영문교정 맘에드는곳(?) 은 어디였나요
참여하기
ZEUS
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ  |  실험 문의 및 제안
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의 member@ibric.org
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
머크