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세균에 transformation한 경우를 말씀하시는 건가요?
같은 복제원점을 가지고 같은 항생제 마커를 가진다면 한 세균체 내에 동시에 존재하지 못합니다.
복제원점이 같아도 각각 다른 항생제 마커를 가지고 있어야 하며 두가지 항생제를 처리해줘야 겨우 동시존재가 가능합니다.
vector의 불화합성은 같은 ori를 가진 다른 종류의 vector 사이에 일어나는 현상입니다.
그러나 동일 vector에 하나는 A gene, 하나는 B gene을 넣고 동시에 cell에 넣었을 때
두개의 gene은 cell내에서 stable합니다.
vector A와 vector B가 같은 ori를 가지고 있을 경우
1. [vector A + insert X]와 [vector A + insert Y]를 동시에 TF하면 두 유전자 X, Y는 stable
하게 유지됨.
그러나 항생제 marker가 동일한 경우 균주 별 plasmid prep.을 해서 확인해야 함.
2. [vector A + insert X]와 [vector B + insert Y]를 동시에 TF하면 두 유전자 X, Y는
불화합성으로 둘 중 하나는 유지되지 못함.
1. [vector A + insert X]와 [vector A + insert Y]를 동시에 TF하면 두 유전자 X, Y는 stable
하게 유지됨.
그러나 항생제 marker가 동일한 경우 균주 별 plasmid prep.을 해서 확인해야 함.
2. [vector A + insert X]와 [vector B + insert Y]를 동시에 TF하면 두 유전자 X, Y는
불화합성으로 둘 중 하나는 유지되지 못함.
SPEED님//
1번과 2번의 차이가 뭐죠?
벡터 A와 B가 같든 다르든 ori가 같으므로 결과는 같아야 합니다.
불화합성은 결국 ori가 같은 경우에 발생하는 현상입니다.
pUC19에 X 유전자, pUC18에 Y 유전자를 클로닝한 후 한 대장균에 넣으면 한 cell내에서 동시에 존재하지 못합니다(동일 ori 동일 항생제 마커).
pUC19에 X 유전자, pUC4K(pUC 벡터에 kanamycine 마커가 들어간 벡터)에 Y 유전자를 클로닝해서 대장균에 넣고 암피실린과 카나마이신을 처리하면 한 대장균 cell에 두 벡터가 동시에 존재할 수 있습니다(동일 ori 다른 항생제 마커).
물론 두 벡터의 ori가 다르면 한 대장균 cell 내에 두 벡터가 동시에 존재할 수 있습니다.
하지만 이 경우에도 두 벡터의 항생제가 달라야 가능합니다.
또 다른 경우, origine이 다른 벡터에 항생제 마커 역시 다르다면, 첫번째 벡터를 먼저 대장균에 넣어서 첫번째 항생제로 screen 하고, 두번째 벡터를 넣고 두번째 항생제를(첫번째 항생제는 처리 안해도) 넣어주면 두 벡터가 다 들어있는 대장균을 얻을 수 있습니다.
실제 예를 들어 보죠.
클로닝에 사용하는 대장균 JM109 균주는 Tet 마커를 가진 F' plasmid를 가지고 있습니다.
여기에 pBR322 ori를 가진 plasmid를 형질전환시키고 그 벡터의 항생제만 처리해도 두 plasmid가 한 JM109 cell에 동시에 존재합니다.
단순히 두가지 gene을
e coli에서 한번에 발현시키는 목적이라면 duet expression system을 사용하시면 됩니다.
http://www.emdmillipore.com/US/en/product/pETDuet-1-DNA-Novagen,EMD_BIO-71146
mammalian cell 이라면 safe harboring locus에 gene targeting해서 하나씩 그냥 넣어주면 될거 같은데요...
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세상에 이런 일이
(비회원)
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19.03.02 20:04
이런 게 있다는 걸 처음 봤습니다.
혹시 이런 현상은 lentivirus vector에도 해당되는 내용인가요?
그리고 왜 ori가 같으면 같이 존재할 수 없는 건지 궁금합니다.
혹시나 관련된 내용이 있는 링크라도 달아주시면 공부하도록 하겠습니다.
너무 신기한 현상이네요