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같은 프라이머로 2번 PCR을 진행하고 싶다는 의미 인가요?
그럴 이유가?
암튼 2차 PCR을 진행할때 1차에서 나온 PCR product는 정제를 하시고 이용하시면 될것 같습니다. PCR purification kit을 이용하거나 gel purification kit으로 1차 PCR 증폭 product를 정제후 사용하세요
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박사과정
(비회원)
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19.02.20 12:00
Google 에서 Nested PCR 을 찾아보세요 ^^
일반적으로 2nd PCR 은 1st 에서 적용한 Primer binding 으로 인한 PCR-product 보다
좀더 작은 길이의, 1st PCR 의 product 보다 명확한 굵기의 PCR-product 를 얻을 때 사용됩니다.
1st 때와 같은 primer 쌍을 적용시킬때는 보통 동일한 size 의PCR-product 를 좀더 명확히 띄우고자 할때 사용하곤 합니다. (ex, non-specific band, smear 패턴의 밴드, PCR 증폭이 명확하게 되지 않을 경우 등등..)
좀더 작은 size 의 PCR-product 를 바라고 Nested PCR 을 진행할 경우
primer 쌍의 Tm 값, product 의 길이, taq 제조사의 menual에 따라 상이할 수 있습니다.
smear 패턴이나 non-specific band 의 출현의 문제가 있을 경우 tm 을 높이거나 그에 맞는 다른 taq (ex. high fidelity 계열의 taq polymerase) 을 선정하기도 합니다.
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레벨6
Applied_Microbe
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19.02.21 11:01
Target gene 검출용 positive control 로 사용하기도 합니다.