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 전체 > Plant Biology > Plant Tissue Culture
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질문 계속 이런 오염이 발생하는데 왜 나오는지 파악이 안되네요...
알누구보다(대학생)  |  2019.02.16 09:09
첨부파일 파일첨부: [크기변환]KakaoTalk_20190216_085529741.jpg (942 KB)
이미지 첨부파일
식물체를 배양하는데 한번씩 이런 오염이 발생하네요  무엇때문에 발생하는지 선배님들 도와주십쇼....
#식물조직배양
 
#오염
 
#곰팡이
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
꽃개구리Applied_Microbe  |  2019.02.16   

같은 상황인지는 모르겠습니다만.... 예전에 클린벤치에서 고형배지를 제조하면 불규칙적으로

곰팡이가 발생하더라고요... 그래서 클린벤치의 프리필터와 헤파필터를 교체하고 1주일에

한번씩 실험실 바닥 벽면, 실험대의 측면과 상판 등을 락스 희석액으로 꼼꼼하게 닦아준 후

부터는 발생하지 않았어요

실험실 출입시 신발은 꼭 교체하시는게 좋습니다. 실험실 전용 슬리퍼 같은걸로요... 신발에

의해서도 곰팡이 포자가 오염될 수도 있습니다.

알누구보다  |  2019.02.16   
네 감사합니다. 말씀하신대로 한번 참고 해 보겠습니다. 
멸균에 문제가 있어도 이런 문제가 발생할수 있다고 생각하는데 어떻게 생각하시는지 한번 들어보고싶습니다.
대왕개구리SPEED  |  2019.02.16   

당연히 멸균에 문제가 있으면 오염이 됩니다.

autoclave는 멸균 tape로 멸균확인이 가능하고 1회용 제품은 모두 멸균된 제품을 사용

그리고 실험을 진행하는 공간 및 공기에 대한 살균 및 멸균을 최대한 유지하면

오염 현상이 사라질 겁니다.

알누구보다  |  2019.02.17   
감사합니다~
꽃개구리Applied_Microbe  |  2019.02.17   

실험실 유지관리 메뉴얼이 있어요... 거기보면 고압멸균기의 유지관리관련 내용이 있어요...

주기적으로 대장균과 포도상구균을 고압멸균해서 살균력을 확인하고요... 그리고 최고온도계

라고 불리는 수은온도계를 넣어서 고압멸균기의 멸균온도를 확인할 수도 있습니다.

autoclave tape은 색변화가 좀 애매할 수 있어서 주기적으로 위의 내용으로 확인하시는게

좋습니다.

님이 사용하시는 배지가 식물쪽이어서 곰팡이가 주류이지만... 일반세균을 배양하는 배지의

경우 멸균기가 문제가 있을 경우 고상배지의 하부나 중간부분에 colony나 기포가 발생하는

것이 확인되기도 합니다.

고상배지와 petri dish가 만나는 부분이나, 고상배지의 중간층 부분에 colony 나 기포가 발생

하면 멸균온도가 정확하게 올라가지 않아 배지 속의 오염 세균이 죽지 않고 살아난 거죠....

하지만 곰팡이는 호기성이라 저런 것은 확인하기 어려우실 거에요

알누구보다  |  2019.02.18   

네 감사합니다. 참고하겠습니다.

알누구보다  |  2019.02.18   

네 감사합니다. 참고하겠습니다.

의견  |  2019.02.18    

식물 배양액은 호르몬 등 필터링하는 성분이 대부분이죠. 배양기간도 최소 며칠, 몇주이상이어서 멸균/살균만으로는 한계가 있습니다. 락스 희석액 같은것으로 살짝 살균하여 식물체 처리해도 포자는 없애기 어렵습니다. 그래서 배양체를 수천개 만들어서 2~3주 후에 몇십개, 몇개 남지 않죠. 그걸로 실험목적을 이루는 경우가 있습니다.  한 2~3주 정도 정말 잘 키우신것 같네요... 포자가 plate 바닥에만 있다면, radiation처리가 잘 안된 plastic ware때문이라 의심할 수도 있겠지만, 아마도 다른 오염된것들을 보시면, 표면의 포자들은 며칠만에 산처럼 피어났을거에요. 별도움 못되어 미안합니다.  : )

꽃개구리Applied_Microbe  |  2019.02.18   

추가로 말씀드릴게 있는데요.... 클린벤치의 헤파필터 확인입니다. 클린벤치에 고상배지를

깔아서 세균이 잡히는지 보시는 방법도 있고요.... 해당 업체에 연락해서 particle counter로

헤파필터 기능 확인을 해보시는 것도 좋습니다.

주기적으로 클린벤치 벽면과 바닥을 알코올 소독 (화염소독 하시는 분들도 있습니다. ) 하시

는게 좋습니다. 클린벤치는 되도록 비워두세요. 그래야 UV lamp에 의한 소독이 효율이 있습

니다.

알누구보다  |  2019.02.18   
예 감사합니다. 정말 힘들게 키웠는데 이런 결과가 나와서 마음이 쓰립니다. 말씀 주신대로 한번 헤파필터 점검 요청 하였습니다. 그리고 배양병도 문제가 있을거 같아서 한번 점검하려고 합니다. 다들 감사합니다.
대왕개구리안재진  |  2019.02.19   

혹시 니트계열의 옷을 입고 벤치 안에서 작업하시나요?
옷에 있던 곰팡이가 날리는 경우도 상당히 많습니다.
깨끗한 토시나 팔을 걷고 배지를 만들어 보세요

꽃개구리Applied_Microbe  |  2019.02.20   

알코올 솜을 만들어서 클린벤치로 손을 넣을때 손에서 팔뚝까지 꼼꼼하게 닦고 들어가시는

것도 좋습니다. 반지나 시계 등은 클러놓고 작업하시는게 좋고요

알누구보다  |  2019.02.20   

감사합니다. 참고하겠습니다.

아무게  |  2019.02.21    
혹시 클린벤치 근처에 창문이 열려있으면, 닫아보세요.
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