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질문 균 spread
올챙이hwya96(대학생)  | 2019.02.15 12:48
1. LB+kn배지에 균을 spread 했는데 균이 하나도 안자라요 이 균은 단백질 발현을 알아보기 위해서 사용하는 BL21으로 원하는 유전자를 전기충격으로 집어넣은 상황 이후 spread 한 것입니다 이게 왜 안자라는 걸까요?
테크닉의 문제일까요??

2. LB+kn배지를 만들 때 카나마이신을 배지에 50mg/L넣으라고 하시는데 이게 카나마이신을 L당 몇 람다를 넣는건가요?
#spread
 
#카나마이신
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리안재진  |  2019.02.15   

1. 균이 안자란다면 항생제에 의해 다 사멸된것으로 보입니다. 정상균은 항생제 상에서 배양이 되지 않습니다.
균에 항생제 저항 유전자가 들어 간 형질전황 균인지 확인이 필요합니다.

2. 람다로 이야기 할것은 아니고 50mg을 넣으면 됩니다. 현재 항생제가 액상으로 가지고 계신것 같은데 농도부터 확인해 보시기 바랍니다. 보통 1000X 정도로 많이 만들어서 사용하지만 확인이 필요한 부분입니다.

대왕개구리SPEED  |  2019.02.15   

1. LB+kn배지에 균을 spread 했는데 균이 하나도 안자라요 이 균은 단백질 발현을 알아보기 위해서 사용하는 BL21으로 원하는 유전자를 전기충격으로 집어넣은 상황 이후 spread 한 것입니다 이게 왜 안자라는 걸까요?

: 형질전환이 안된것이 제일 큰 이유 아닐까합니다.

2. LB+kn배지를 만들 때 카나마이신을 배지에 50mg/L넣으라고 하시는데 이게 카나마이신을 L당 몇 람다를 넣는건가요?

: stock 농도에 따라 달라지겠지만 stock이 50mg/ml이라면 1ml를 넣으면 됩니다.

대왕개구리안재진  |  2019.02.15   

혹지 배지에 50mg/L의 농도로 selectino 배지를 만들었는지도 확인이 필요합니다.

이 농도는 너무 높은 농도인듯 합니다. 일반적으로 스피드님처럼 50ug/ml (20 ~ 100ug/ml) 정도의 농도를 사용하기 때문에 항생제 농도가 너무 높아서 균이 자라지 않을수도 있습니다.

꽃개구리Applied_Microbe  |  2019.02.15   

BL21에 유전자 삽입이 않된거 같네요...electroporation 조건이 안맞는거 같네요

전압이나 전류... 시간등의 조건이 안맞으면... electroporation과정에서 다 죽어요

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