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같은 방법으로 했었을 때 전 사람의 경우에는 나왔었던거라면
현재 본인이 하고 있는것과 뭐가 달라졌는지 확인해보세요.
웨스턴블랏 버퍼를 바꿨다면 만드는 과정에서 실수 했을 수도 있으니 다시 만들어보는것도 좋구요.
transfer하고 나서 ponceau s staining 해보세요. 폰슈염색해서 transfer가 되는것이 확인되면 antibody 문제인거고, transfer가 안된거라면 그 전 단계에서 trouble shooting을 할 수 있어요. trouble shooting하기 좋을 거에요.
그리고 transfer시 뒷패드로 조금 넘어가는경우는 큰 문제는 되지 않습니다. 뒤로 넘어가도 멤브레인에서 다 빠져나가는건 아니니깐요. 작은 size의 경우 원래 잘 넘어가긴 합니다. 그렇다고 쉽게 다 빠져나가지도 않아요.
일단은 지금 단계에서 확인해볼만한건 폰슈염색해서 문제의 과정이 어디인지 확인해보는게 좋을거 같네요.
밴드가 끌리는 문제는 voltage를 낮추면 완화할 수 있습니다.
웨스턴블랏에 대해 정리해놓은 파일 첨부해드렸습니다. 찬찬히 보고 실험하는데 참고하시길 바랍니다.