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 전체 > Molecular Biology-RNA > Purification/Isolation
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질문 RNA-seq sample preparations 방법
알laniel(대학원생)  |  2019.02.05 17:11
동물 조직에서 RNA를 추출하여 RNA-seq를 하고 싶습니다.

제가 아는 방법이 맞는건지 궁금하여 글을 남깁니다.

sacrifice할때 관류를 하여 장기내의 혈액을 제거하여 주고, 그 후에 RNA LATER에 조직을 적당량을 잘라서 container에 넣은 후에 RNA를 추출하면 되는건가요?

부검후에 바로 추출이 힘든 경우에는 -80도에 보관하구요...

좀전 실험에서는 관류 없이 장기를 적출하고 액체질소에 장기를 튀긴후에 -80도에서 보관을 하였었는데 RNA qualitiy가 많이 맞더라구요 ㅜㅜ

쥐가 한마리에 40마넌가까이 하는지라... 한셋트를 한번 실패하고 나니 제가 아는것이 제대로 된건지 의구심이 드네요...

답변 부탁드립니다

#RNA isolation
 
#RNA-seq
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
꽃개구리느림보  |  2019.02.07   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

액체질소에 바로 얼렸는데 추출한 RNA가 분해되었다는 것은 보관이나 샘플링이 아니라 추출의 문제입니다. 그리고 조직의 종류에 따라서 프로토콜이 적합하지 않은 경우가 많습니다. Trouble shooting 문서를 살펴보세요. 혈액량이 많았다면 추출시약이 희석된 결과일 수도 있습니다. 그렇다면 Trizol LS 계열을 고려할 수 있습니다. 액체는 타월에 흡수시켜서 완전히 제거한 후에 넘어가는 것이 안전합니다. 

RNAlater는 액체질소나 -80도 보관이 불가능한 상황에서 사용하는 것입니다. 조직이 덩어리라면 액체와 접촉이 잘 되도록 잘게 잘라줘야 합니다. 보관할 때도 상온에 노출되지 않도록 조심하시고요. 추출할 때는 RNAlater를 제거해서 추출시약의 농도가 희석되지 않도록 해야 합니다. 



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