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질문 ChIP 실험을 위한 조직 Fixation 시 Over-fixation 가능성에 대해
개구리Marine(대학원생)  |  2019.01.31 15:09

ChIP 실험을 위해 조직을 고정 한 뒤, 이 후 Chromatin shearing 과정을 실험중에 있습니다.


1. 보통 조직을 고정 할 때, 4% formaldehyde 와 같은 고정액에 조직을 10분 정도 처리 한 뒤,
2. Glycine 이 포함된 Stop solution 을 10분정도 처리 후 조직 고정단계를 멈추어 주고,
3. 그다음 Washing 한 뒤 다음단계로 들어가게 되는데요.


이 때 2. 단계에서, 4% Fromaldehyde, + Stop solution (Glycine) 이 포함된 상태에서 원래는 5~10분 처리 이지만, 약 2~3시간 조직을 오래 보관하게 되었습니다.  


이렇게 진행 할 경우 너무 Over fixation 되어서 다음 단계에 영향을 미칠 수 있을까요?
아니면, Stop solution 을 처리 한 상태이므로 Fixation 은 더 진행되지 않는 것 일까요?


관련 경험이 있으신분께 고견을 구합니다!

#Fixation
 
#ChIP
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리유전학도^^v  |  2019.01.31   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

Methods Mol Biol. 2009 ; 538: 409–423. doi:10.1007/978-1-59745-418-6_21

이 논문 4. Note >> 1 내용 읽어 보세요.

Fixation 조건을 실험적으로 결정해야 한다네요.


이 논문 내용으로 생각해 보면, "영향을 미칠 수 있다"가 됩니다.

개인적인 생각으로는 decross-linking만 잘 시키면 실험에 문제가 없을 것 같지만요.

참고하세요.

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