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질문 피씨알 밴드
알hahahah(일반인)  |  2018.12.06 11:36

안녕하세요..
cloning 진행 전에 pcr 조건 잡는 중이예요.
원하는 사이즈에 피씨알 밴드가 떠서 gel extraction해서 진행하였는데요.
다시 같은 조건(온도, taq, extension time, cycle) 동일하게 해서 진행했더니 밴드가 거의 나타나지 않습니다. 그래서 다시 온도 조정을 해봤더니 똑같이 밴드가 거의 보이지 않듯이 나옵니다.. primer는 1달전에 dilution한 것 이용했구요..
답변 부탁드립니다 ㅠ~~

#pcr
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  2018.12.06   

이런 질문은 전기영동 사진이 있으면 좋습니다.

target band가 아예 안보이는지.. primer dimer는 정상적으로 나오는지 등등

전기영동 사진에서 여러가지 문제점을 발견할 수 있습니다.

알hahahah  |  2018.12.06   
첨부파일 파일첨부: 1.jpg (88 KB)
이미지 첨부파일

처음 진행했던 pcr사진이구요.. 원하는 위치는 1.9kb입니다. 

알hahahah  |  2018.12.06   
첨부파일 파일첨부: 2.jpg (75 KB)
이미지 첨부파일

재진행했을때는 희미하게 밴드는 보이지만 거의 없는것과 마찬가지로 보여요..

대왕개구리SPEED  |  2018.12.06   

cloning하기 위해 PCR 을 한다면 primer 서열을 다시 디자인 해야 할 것 같습니다.

비특이 band가 더 많이 증폭되네요..

target band가 나오고 안나오고가 문제가 아닌 것 같습니다.

개구리곰돌2  |  2018.12.06   

PCR인데 target band보다 다른 band가 너무 많은것 같습니다.
Primer를 다시 제작하시는 것이 나을것 같아요.

Primer dilution은 한달전에 한것을 사용해도 괜찮습니다.

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