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Raw 264.7 cell에 NAC 처리 농도는 1mM~20mM사이에서 NO assay를
진행합니다.
이 범위에서 적정 농도를 찾아보세요.
그리고 동일 용매에 녹여서 하는게 좋을 듯 합니다.
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레벨3
디룽
(대학원생)
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18.12.05 11:24
답변감사드립니다.ㅠㅠ
제가 저번에 실험할때 cell을 5X10^4 cell/well로 풀어서 LPS를 1ug/ml를 처리하였더니 cell수가 너무 많아서 이번에 재 실험을 1X10^4cell/well 농도로 실험을 하려고 합니다.
그렇다면 LPS농도도 조금 낮추어야 할까요?....
첫 실험때 NO 스탠다드를 이용하여 검정곡선으로 양을 산출했을때 시료를 처리하지 않고 LPS만 처리한 CELL에서 NO 가 90uM이나왔습니다..굉장히 많이 생성된거라고 하여 셀 수를 줄이고 재실험을 진행하려 하는데 조언부탁드립니다....
또한 이정도 CELL의 농도에서 Positive control로 사용할 NAC를1mM~20mM사이의 농도에서 처리해서 실험을 진행하면되나요 ?ㅠㅠㅠㅠㅠㅠㅠ
제가 저번에 실험할때 cell을 5X10^4 cell/well로 풀어서 LPS를 1ug/ml를 처리하였더니 cell수가 너무 많아서 이번에 재 실험을 1X10^4cell/well 농도로 실험을 하려고 합니다.
: 5X10^4 cell/well은 많은 cell 수가 아니라고 보여집니다.
그렇다면 LPS농도도 조금 낮추어야 할까요?....
: 실험 목적에 맞게 LPS 농도를 달리하여 처리 후 원하는 정도의 결과가 나오는 LPS
양을 정하면 됩니다.
처리하는 LPS양은 고정되어 있는건 아니지만 조금 줄이는 것도 좋을 듯합니다.
첫 실험때 NO 스탠다드를 이용하여 검정곡선으로 양을 산출했을때 시료를 처리하지 않고 LPS만 처리한 CELL에서 NO 가 90uM이나왔습니다..
: 예들들어 100ng/ml의 LPS를 처리하면 NO 55~75 사이 정도 나올겁니다.
또한 이정도 CELL의 농도에서 Positive control로 사용할 NAC를1mM~20mM사이의 농도에서 처리해서 실험을 진행하면되나요?
: LPS 농도와 cell 수가 정해지면 동일 cell 수에서 처리하는 NAC 농도를 찾아 보는게
좋을 듯 합니다.