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DH5a에 TF한 이유가 있나요?
E. coli integration이 안될 가능성이 높을것 같네요
만약 gDNA integration되어도 attB가 살아있을겁니다.
그리고 혹시 형질전환된 DH5a의 plasmid를 한번 분리해 보세요.
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레벨1
머랭
(과기인)
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18.11.29 22:52
attB 서열은 프라이머에 없고 attB서열이 전부다 pcr 될 수 있게 attB를 기준으로 앞부분과 뒷부분에 염기서열을 가지고 프라이머를 만들었습니다
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레벨1
머랭
(과기인)
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18.11.29 22:54
두개의 plasmid를 분리해봤는데 2개의 밴드가 안나오고 크기가 큰 밴드 1개가 나왔습니다.
제 생각에는 gDNA에 integration 안될 확률이 99%, integration 될 확률이 1%미만이라고
생각듭니다.
DH5a에서 plasmid를 분리해 보면 attB donor plasmid와 phiC31는 분리가 될겁니다.
둘다 E. coli에서 복제가 가능합니다.
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레벨1
머랭
(과기인)
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18.11.29 23:01
복제만 하고 intagration은 안되는건가요???
네.. 그래서 첫 답변에 DH5a에 형질전환한 이유를 물어봤습니다.
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레벨1
머랭
(과기인)
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18.11.29 23:09
실험실에서 실험하고자하는 균을 하기전에 Dh5a에 먼저 넣어서되는지 확인하려고 했었습니다.
Dh5a에서는 원하는 system이 작동하지 않을 겁니다.
그리고 최종 원하는 cell이 미생물이면 균주에 따라 작동 안할 가능성이 높습니다.
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레벨1
머랭
(과기인)
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18.11.29 23:27
제가 아직 모르는게 너무 많은 학부생이라 왜 Dh5a에서는 작동이 되지않는지 이유를 알 수 있을까요??
메일주소 남기시면 메일로 연락드리겠습니다.
다른 분이 추가 답변을 드릴 수도 있을 겁니다.
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레벨1
머랭
(과기인)
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18.11.30 10:51
znaks67@naver.com 입니다 감사합니다